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摘 要：将200羽雏鸡，随机分入4个试验组（红白各半）：复方中药制剂组（Ⅰ组）、复方益生菌制剂组（Ⅱ组）、复方中药-益生菌制剂组（Ⅲ组）、对照组（Ⅳ组），进行为期42 d的试验，比较各处理方法对雏鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌的影响。结果表明：试验初期复方益生菌制剂单独应用对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌抑制作用优于复方中药制剂组及复方中药-益生菌制剂组；试验后期复方中药与从健康白牦牛肠道内分离纯化得到的枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌复方益生菌制剂联合应用对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌有极明显的抑制作用。
关键词：雏鸡；大肠杆菌；沙门氏菌；复方制剂
中图分类号：S855.1 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2016）05-0084-02
随着生活水平的逐步提高，人类对畜禽产品的需求已经不仅仅是数量上的满足，而对其品质提出了更多更高的要求。然而在目前集约化养殖模式中，环境污染严重，同时疾病防治上大量使用抗生素，由此引发了一系列社会危害[1]。如何调节好养殖环境、解决并提高畜禽的抗病能力，改善群体免疫力及提高畜禽的生产性能成为研究的热点。中药含有丰富的氨基酸、矿物质和维生素等营养物质，能平衡和完善畜禽日粮，所含的生物活性物质具有抗菌、抗应激、抗氧化和增强免疫的作用。益生素可提高动物的生产性能，提高饲料转化率，增强动物抗病能力[2]。本文研究了复方中药制剂与微生态制剂联合应用对雏鸡肠道有害菌的抑制作用，以期为中药-益生菌制剂在临床用于防治生态鸡常见细菌性疾病的推广应用奠定理论基础。
1 材料与方法
1.1 益生菌制剂
复方益生菌制剂系从天祝健康白牦牛肠道内提取并进行分离纯化，并由本院动物微生物实验室自制。主要由枯草芽孢杆菌及嗜酸乳杆菌（活菌含量≥30×108 cfu/g）组成。
1.2 复方中药制剂
采用传统水煎法，将白头翁、黄连、黄柏、秦皮、黄芪、淫羊藿、山楂用蒸馏水洗净，浸泡，加8～10倍量蒸馏水煎煮30 min，然后再加8～10倍量蒸馏水煎煮30 min，合并滤液用旋转蒸发仪75 ℃浓缩至1 g/mL，灭菌，4 ℃保存[3]。
1.3 试验动物
1日龄肉杂雏鸡200羽，其中白肉杂（父本为艾维茵父母代肉种鸡，母本为商品代海兰褐蛋鸡）100羽，红肉杂（父本为安卡红父母代肉种鸡，母本为商品代海兰褐蛋鸡）100羽，由甘肃畜牧工程职业技术学院种鸡场提供。
1.4 培养基
伊红美蓝（EMB）培养基、麦康凯（MCA）培养基由本研究室按常规方法制备，培养基灭菌后置4 ℃冰箱保存备用。
1.5 试验鸡分组与处理
1日龄肉杂健康雏鸡200羽，随机分为4组（红白各半），分别为复方中药制剂组（Ⅰ组）、复方益生菌制剂预防组（Ⅱ组）、复方中药-益生菌制剂组（Ⅲ组）及对照组（Ⅳ组），每组50羽。各组鸡自由采食和饮水，且严格按照蛋雏鸡（0～6周龄）饲养管理办法进行，试验期为42 d。从1日龄开始，Ⅰ组在鸡饲料中添加预防量的复方中药制剂，按1.5 mL/（羽·d）浓缩液（按1.2制备）混于饲料中饲喂；Ⅱ组在鸡饲料中添加0.25 %的复方益生菌制剂（活菌总数≥3.0×108 cfu/g）；Ⅲ组在鸡饲料中添加1.5 mL中药浓缩液及0.25 %的复方益生菌制剂（活菌总数≥3.0×108 cfu/g）。
1.6 样品采集与处理
分别于试验的第7、21和42天采集试验鸡粪便。取新鲜粪便1.0 g 放于盛有10 mL灭菌水的试管内，振摇成均匀的菌悬液，制成1∶10的稀释液，10倍递增稀释。根据要求或对样本的估计，选择2～3个适宜稀释度（以长30～100个菌落为宜）吸取该稀释度0.2 mL稀释液分别置于EMB培养基、MCA培养基内，每个稀释度作3个平皿。用无菌玻璃棒将稀释液均匀涂布于整个培养基上，翻转平板，置于（36±1） ℃的温箱内培养（24±2） h后取出，分别计算平板内大肠杆菌数和沙门氏菌落数，乘以稀释倍数，即得每克样品所含活菌数（结果以对数均值log10 cfu/g内容物表示）。
1.7 细菌的判定
细菌的判定方法参考《伯杰氏细菌鉴定手册》。
1.8 数据统计分析
试验数据用Microsoft Excel软件整理，SPSS 18.0统计软件进行单因素方差分析，并进行LSD法多重比较，试验数据以“平均值±标准差”表示。
2 结果与分析
2.1结果
由表1可见，与对照组相比，不同处理组不同程度地影响了鸡各阶段肠道的微生物菌群数。（1）给药7 d后，复方中药制剂组的大肠杆菌数与对照组比较无明显变化，复方益生菌制剂组、复方中药-益生菌制剂组与对照组比较，大肠杆菌数有一定的减少，但差异不显著；与对照组比较，各试验组的沙门氏菌数与对照组比较差异不显著。（2）给药21 d后，与对照组比较，复方中药制剂组的大肠杆菌数与对照组比较有减少的趋势，但差异不显著（P>0.05），复方中药-益生菌制剂组的大肠杆菌数显著低于对照组（P<0.05），复方益生菌制剂组的大肠杆菌数与对照组比较差异极显著（P<0.01）；与对照组比较，复方中药制剂组的沙门氏菌数与对照组比较有减少的趋势，差异不显著（P>0.05），复方益生菌制剂组、复方中药-益生菌制剂组的沙门氏菌数显著低于对照组（P<0.05）。（3）给药42 d后，与对照组比较，复方中药制剂组、复方益生菌制剂组的大肠杆菌数与对照组比较差异显著（P<0.05），复方中药-益生菌制剂组的大肠杆菌数显著低于对照组，差异极显著（P<0.01）；与对照组比较，复方中药制剂组、复方益生菌制剂组的沙门氏菌数与对照组比较差异显著（P<0.05），复方中药-益生菌制剂组的沙门氏菌数与对照组比较差异极显著（P<0.01）。
综上可见，饲料中添加中药及益生菌的复方制剂，可在不同时间段、不同程度抑制鸡肠道中大肠杆菌和沙门氏菌生长。
2.2 分析与讨论
本试验通过对雏鸡从1日龄开始在饲料中添加复方中药、复方益生菌制剂、复方中药-益生菌制剂，并进行比较，发现随着日龄的增长复方中药与益生菌制剂的协同作用越明显，21日龄单纯使用复方益生菌制剂对鸡肠道内大肠杆菌和沙门氏菌的抑制作用明显，42日龄复方中药与益生菌制剂联合应用，对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌有抑制作用明显。这主要是因为家禽肠道菌的组成和结构具有其明显的特点，刚出壳的雏鸡肠道内无菌，随着摄食的开始细菌总数也呈急剧增加，7日龄时小肠部位的菌群已基本形成，到25日龄时盲肠内菌群才能建立。正常菌群在雏鸡消化道完成定植过程需要30 d左右[4，5]。本试验选择雏鸡作为研究对象，因其肠道菌群尚未稳定，内服有益菌能显著提高肠道中的优势菌群数量，抑制有害菌的生长，改善菌群结构。
复方中药选用加味白头翁汤，其中白头翁具有清热、解毒、凉血作用，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌等都有抑制作用；秦皮涩肠清热，对痢疾杆菌、伤寒杆菌等都有较强的抑制作用[6，7]；黄柏、黄连清热燥湿、解毒，是广谱抗菌药物，黄芪、淫羊藿能提高免疫功能，增强体质；山楂有助于改善消化机能、促进食欲。
关键词：雏鸡；大肠杆菌；沙门氏菌；复方制剂
中图分类号：S855.1 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2016）05-0084-02
随着生活水平的逐步提高，人类对畜禽产品的需求已经不仅仅是数量上的满足，而对其品质提出了更多更高的要求。然而在目前集约化养殖模式中，环境污染严重，同时疾病防治上大量使用抗生素，由此引发了一系列社会危害[1]。如何调节好养殖环境、解决并提高畜禽的抗病能力，改善群体免疫力及提高畜禽的生产性能成为研究的热点。中药含有丰富的氨基酸、矿物质和维生素等营养物质，能平衡和完善畜禽日粮，所含的生物活性物质具有抗菌、抗应激、抗氧化和增强免疫的作用。益生素可提高动物的生产性能，提高饲料转化率，增强动物抗病能力[2]。本文研究了复方中药制剂与微生态制剂联合应用对雏鸡肠道有害菌的抑制作用，以期为中药-益生菌制剂在临床用于防治生态鸡常见细菌性疾病的推广应用奠定理论基础。
1 材料与方法
1.1 益生菌制剂
复方益生菌制剂系从天祝健康白牦牛肠道内提取并进行分离纯化，并由本院动物微生物实验室自制。主要由枯草芽孢杆菌及嗜酸乳杆菌（活菌含量≥30×108 cfu/g）组成。
1.2 复方中药制剂
采用传统水煎法，将白头翁、黄连、黄柏、秦皮、黄芪、淫羊藿、山楂用蒸馏水洗净，浸泡，加8～10倍量蒸馏水煎煮30 min，然后再加8～10倍量蒸馏水煎煮30 min，合并滤液用旋转蒸发仪75 ℃浓缩至1 g/mL，灭菌，4 ℃保存[3]。
1.3 试验动物
1日龄肉杂雏鸡200羽，其中白肉杂（父本为艾维茵父母代肉种鸡，母本为商品代海兰褐蛋鸡）100羽，红肉杂（父本为安卡红父母代肉种鸡，母本为商品代海兰褐蛋鸡）100羽，由甘肃畜牧工程职业技术学院种鸡场提供。
1.4 培养基
伊红美蓝（EMB）培养基、麦康凯（MCA）培养基由本研究室按常规方法制备，培养基灭菌后置4 ℃冰箱保存备用。
1.5 试验鸡分组与处理
1日龄肉杂健康雏鸡200羽，随机分为4组（红白各半），分别为复方中药制剂组（Ⅰ组）、复方益生菌制剂预防组（Ⅱ组）、复方中药-益生菌制剂组（Ⅲ组）及对照组（Ⅳ组），每组50羽。各组鸡自由采食和饮水，且严格按照蛋雏鸡（0～6周龄）饲养管理办法进行，试验期为42 d。从1日龄开始，Ⅰ组在鸡饲料中添加预防量的复方中药制剂，按1.5 mL/（羽·d）浓缩液（按1.2制备）混于饲料中饲喂；Ⅱ组在鸡饲料中添加0.25 %的复方益生菌制剂（活菌总数≥3.0×108 cfu/g）；Ⅲ组在鸡饲料中添加1.5 mL中药浓缩液及0.25 %的复方益生菌制剂（活菌总数≥3.0×108 cfu/g）。
1.6 样品采集与处理
分别于试验的第7、21和42天采集试验鸡粪便。取新鲜粪便1.0 g 放于盛有10 mL灭菌水的试管内，振摇成均匀的菌悬液，制成1∶10的稀释液，10倍递增稀释。根据要求或对样本的估计，选择2～3个适宜稀释度（以长30～100个菌落为宜）吸取该稀释度0.2 mL稀释液分别置于EMB培养基、MCA培养基内，每个稀释度作3个平皿。用无菌玻璃棒将稀释液均匀涂布于整个培养基上，翻转平板，置于（36±1） ℃的温箱内培养（24±2） h后取出，分别计算平板内大肠杆菌数和沙门氏菌落数，乘以稀释倍数，即得每克样品所含活菌数（结果以对数均值log10 cfu/g内容物表示）。
1.7 细菌的判定
细菌的判定方法参考《伯杰氏细菌鉴定手册》。
1.8 数据统计分析
试验数据用Microsoft Excel软件整理，SPSS 18.0统计软件进行单因素方差分析，并进行LSD法多重比较，试验数据以“平均值±标准差”表示。
2 结果与分析
2.1结果
由表1可见，与对照组相比，不同处理组不同程度地影响了鸡各阶段肠道的微生物菌群数。（1）给药7 d后，复方中药制剂组的大肠杆菌数与对照组比较无明显变化，复方益生菌制剂组、复方中药-益生菌制剂组与对照组比较，大肠杆菌数有一定的减少，但差异不显著；与对照组比较，各试验组的沙门氏菌数与对照组比较差异不显著。（2）给药21 d后，与对照组比较，复方中药制剂组的大肠杆菌数与对照组比较有减少的趋势，但差异不显著（P>0.05），复方中药-益生菌制剂组的大肠杆菌数显著低于对照组（P<0.05），复方益生菌制剂组的大肠杆菌数与对照组比较差异极显著（P<0.01）；与对照组比较，复方中药制剂组的沙门氏菌数与对照组比较有减少的趋势，差异不显著（P>0.05），复方益生菌制剂组、复方中药-益生菌制剂组的沙门氏菌数显著低于对照组（P<0.05）。（3）给药42 d后，与对照组比较，复方中药制剂组、复方益生菌制剂组的大肠杆菌数与对照组比较差异显著（P<0.05），复方中药-益生菌制剂组的大肠杆菌数显著低于对照组，差异极显著（P<0.01）；与对照组比较，复方中药制剂组、复方益生菌制剂组的沙门氏菌数与对照组比较差异显著（P<0.05），复方中药-益生菌制剂组的沙门氏菌数与对照组比较差异极显著（P<0.01）。
综上可见，饲料中添加中药及益生菌的复方制剂，可在不同时间段、不同程度抑制鸡肠道中大肠杆菌和沙门氏菌生长。
2.2 分析与讨论
本试验通过对雏鸡从1日龄开始在饲料中添加复方中药、复方益生菌制剂、复方中药-益生菌制剂，并进行比较，发现随着日龄的增长复方中药与益生菌制剂的协同作用越明显，21日龄单纯使用复方益生菌制剂对鸡肠道内大肠杆菌和沙门氏菌的抑制作用明显，42日龄复方中药与益生菌制剂联合应用，对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌有抑制作用明显。这主要是因为家禽肠道菌的组成和结构具有其明显的特点，刚出壳的雏鸡肠道内无菌，随着摄食的开始细菌总数也呈急剧增加，7日龄时小肠部位的菌群已基本形成，到25日龄时盲肠内菌群才能建立。正常菌群在雏鸡消化道完成定植过程需要30 d左右[4，5]。本试验选择雏鸡作为研究对象，因其肠道菌群尚未稳定，内服有益菌能显著提高肠道中的优势菌群数量，抑制有害菌的生长，改善菌群结构。
复方中药选用加味白头翁汤，其中白头翁具有清热、解毒、凉血作用，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌等都有抑制作用；秦皮涩肠清热，对痢疾杆菌、伤寒杆菌等都有较强的抑制作用[6，7]；黄柏、黄连清热燥湿、解毒，是广谱抗菌药物，黄芪、淫羊藿能提高免疫功能，增强体质；山楂有助于改善消化机能、促进食欲。