【摘 要】
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目的 在同一载体上串联针对不同靶基因的短发夹状RNA(shRNA),探讨其同时干预不同靶基因的效应.方法 在已筛选到高效干预靶基因Ku70、Ku80的shRNA表达载体的基础上,构建串联的shRNA表达载体psiRNAKus,该载体能同时表达针对Ku70的shRNA和针对Ku80的shRNA,酶切鉴定和DNA测序确定psiRNAKus构建成功后,将其转染入肝癌细胞株HepG2,转染后48 h 提取
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,4
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目的 在同一载体上串联针对不同靶基因的短发夹状RNA(shRNA),探讨其同时干预不同靶基因的效应.方法 在已筛选到高效干预靶基因Ku70、Ku80的shRNA表达载体的基础上,构建串联的shRNA表达载体psiRNAKus,该载体能同时表达针对Ku70的shRNA和针对Ku80的shRNA,酶切鉴定和DNA测序确定psiRNAKus构建成功后,将其转染入肝癌细胞株HepG2,转染后48 h 提取细胞总RNA和蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测其干预靶基因的效果.结果 psiRNAKus表达的shRNAs能够同时抑制Ku70和Ku80在转录水平和翻译水平的表达.结论 在同一载体上串联的针对不同靶基因的shRNA表达系统有望在实验和临床治疗中得到应用。
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