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[摘 要]目的 建立藿香正气片中橙皮苷的含量测定方法。方法 采用C18色谱柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-冰醋酸-水（体积比35∶4∶61），流速：1.0 mL/min，检测波长：283 nm。结果 橙皮苷在0.0895～0.716 μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系，平均回收率为99.16%，RSD=1.85%（n =6）。结论 建立的方法简便、准确，可用于藿香正气片的质量控制。
[关键词]藿香正气片；橙皮苷；高效液相色谱法
中图分类号：TL271+.4文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）21-0255-01
藿香正气片系国家中成药标准汇编内科肺系（一）分册收载品种，由广藿香、陈皮、紫苏叶油等10味中药组成，具有解表化湿、理气和中的功效，用于外感风寒、内伤湿滞或夏伤暑湿所致的感冒，症见头痛昏重、胸膈痞闷、脘腹胀痛、呕吐泄泻；胃肠型感冒见上述症候者。为了保证药品质量，提高药品标准，本文采用高效液相色谱法对本品中陈皮含有的橙皮苷进行了含量测定，并对色谱条件进行了研究，结果表明，本法操作简便、重现性好、测定结果准确。
1 仪器与试药
安捷伦1100高效液相色谱仪，VWD检测器，Agilent 1100化学工作站；BSZZ4S型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。橙皮苷对照品（批号：0721-200010，供含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。藿香正气片自制（批号070312、070313、070314）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Hypersil BDS C18色谱柱（200 mm×4.6mm，5μm；大连依利特）；流动相：甲醇-冰醋酸-水（体积比35∶4∶61）；流速：1.0mL/min，检测波长：283nm；柱温：30℃；进样量：20μL。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 依据处方中的比例，按制法制备缺陈皮的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 系统适用性试验
按照上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、缺陈皮阴性对照溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，阴性对照不干扰。
2.4 线性关系的考察
取橙皮苷对照品，分别制成质量浓度为8.95、17.9、35.8、53.7、71.6 μg/ mL的样品，进样量20 μL，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，橙皮苷的进样浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=21.04354X-1.53282，r=1.0000，结果表明橙皮苷在0.0895～0.716 μg之间呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液20 μL，重复进样6次，记录橙皮苷峰面积并計算峰面积的相对标准偏差。结果橙皮苷峰面积平均值为752.152，RSD为1.09%。
2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h测定橙皮苷峰面积，并计算橙皮苷峰面积积分值的相对标准偏差。结果橙皮苷峰面积平均值为743.396，RSD为1.62%。结果表明，供试品溶液在8 h内基本稳定。
2.7 重复性试验
取样品（批号：070314）6份，分别进样测定，结果橙皮苷平均含量为0.275 mg/片；RSD=1.35%。
2.8 加样回收率试验
取已知含量（070314批样品；橙皮苷含量0.275mg/片）的样品20片，精密称定，研细，混匀，取0.5 g，精密称定，共取6份，分别加入橙皮苷对照品溶液（71. 6 μg/mL）6mL，分别按“2.2.2”项方法制备供试液，依法测定，结果平均回收率为99.16%，RSD=1.85%。
2.9 样品含量测定
取3批样品（批号070312、070313、070314），分别按“2.2.2”项方法制备供试液，进样测定，结果3批品中橙皮苷的平均含量分别为0.278、0.270、0.275？？ mg/片。
3 讨论
3.1 橙皮苷的提取是影响其含量测定的关键之一。本试验以甲醇为提取溶剂，比较超声30min、超声40min、回流0.5h、回流1 h不同提取方法的橙皮苷含量。结果发现，超声40min和回流1h的提取效率相当，基本能将橙皮苷提取完全。从操用实用、方便的角度考虑，确定橙皮苷的提取方式为甲醇超声40 min。
3.2 采用HPLC法测定橙皮苷含量的文献有很多，本文对甲醇-水、甲醇-0.5%磷酸水、甲醇-冰醋酸水等流动相进行了考察，结果发现在甲醇中加入冰醋酸能很好地改善分离度和柱效，经过条件优化选择，确定了甲醇-冰醋酸-水（体积比35∶4∶61） 为流动相，橙皮苷峰与其他组分能实现完全分离。
参考文献
[1] 国家药典委员会.国家中成药标准汇编[S]//中成药地方标准上升国家标准部分：内科肺系（一）分册.2002：451.
[2] 廖厚知，粟华生，梁山丹，等.HPLC测定银芒止咳片中橙皮苷的含量[J].中成药，2007，29（7）：附22-23.
[3] 庞小雄，梁松庆，钟兆健，等.HPLC法测定拈痛丸中橙皮苷的含量[J].中药材，2007，30（6）：734-735.
[关键词]藿香正气片；橙皮苷；高效液相色谱法
中图分类号：TL271+.4文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）21-0255-01
藿香正气片系国家中成药标准汇编内科肺系（一）分册收载品种，由广藿香、陈皮、紫苏叶油等10味中药组成，具有解表化湿、理气和中的功效，用于外感风寒、内伤湿滞或夏伤暑湿所致的感冒，症见头痛昏重、胸膈痞闷、脘腹胀痛、呕吐泄泻；胃肠型感冒见上述症候者。为了保证药品质量，提高药品标准，本文采用高效液相色谱法对本品中陈皮含有的橙皮苷进行了含量测定，并对色谱条件进行了研究，结果表明，本法操作简便、重现性好、测定结果准确。
1 仪器与试药
安捷伦1100高效液相色谱仪，VWD检测器，Agilent 1100化学工作站；BSZZ4S型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。橙皮苷对照品（批号：0721-200010，供含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。藿香正气片自制（批号070312、070313、070314）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Hypersil BDS C18色谱柱（200 mm×4.6mm，5μm；大连依利特）；流动相：甲醇-冰醋酸-水（体积比35∶4∶61）；流速：1.0mL/min，检测波长：283nm；柱温：30℃；进样量：20μL。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 依据处方中的比例，按制法制备缺陈皮的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 系统适用性试验
按照上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、缺陈皮阴性对照溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，阴性对照不干扰。
2.4 线性关系的考察
取橙皮苷对照品，分别制成质量浓度为8.95、17.9、35.8、53.7、71.6 μg/ mL的样品，进样量20 μL，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，橙皮苷的进样浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=21.04354X-1.53282，r=1.0000，结果表明橙皮苷在0.0895～0.716 μg之间呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液20 μL，重复进样6次，记录橙皮苷峰面积并計算峰面积的相对标准偏差。结果橙皮苷峰面积平均值为752.152，RSD为1.09%。
2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h测定橙皮苷峰面积，并计算橙皮苷峰面积积分值的相对标准偏差。结果橙皮苷峰面积平均值为743.396，RSD为1.62%。结果表明，供试品溶液在8 h内基本稳定。
2.7 重复性试验
取样品（批号：070314）6份，分别进样测定，结果橙皮苷平均含量为0.275 mg/片；RSD=1.35%。
2.8 加样回收率试验
取已知含量（070314批样品；橙皮苷含量0.275mg/片）的样品20片，精密称定，研细，混匀，取0.5 g，精密称定，共取6份，分别加入橙皮苷对照品溶液（71. 6 μg/mL）6mL，分别按“2.2.2”项方法制备供试液，依法测定，结果平均回收率为99.16%，RSD=1.85%。
2.9 样品含量测定
取3批样品（批号070312、070313、070314），分别按“2.2.2”项方法制备供试液，进样测定，结果3批品中橙皮苷的平均含量分别为0.278、0.270、0.275？？ mg/片。
3 讨论
3.1 橙皮苷的提取是影响其含量测定的关键之一。本试验以甲醇为提取溶剂，比较超声30min、超声40min、回流0.5h、回流1 h不同提取方法的橙皮苷含量。结果发现，超声40min和回流1h的提取效率相当，基本能将橙皮苷提取完全。从操用实用、方便的角度考虑，确定橙皮苷的提取方式为甲醇超声40 min。
3.2 采用HPLC法测定橙皮苷含量的文献有很多，本文对甲醇-水、甲醇-0.5%磷酸水、甲醇-冰醋酸水等流动相进行了考察，结果发现在甲醇中加入冰醋酸能很好地改善分离度和柱效，经过条件优化选择，确定了甲醇-冰醋酸-水（体积比35∶4∶61） 为流动相，橙皮苷峰与其他组分能实现完全分离。
参考文献
[1] 国家药典委员会.国家中成药标准汇编[S]//中成药地方标准上升国家标准部分：内科肺系（一）分册.2002：451.
[2] 廖厚知，粟华生，梁山丹，等.HPLC测定银芒止咳片中橙皮苷的含量[J].中成药，2007，29（7）：附22-23.
[3] 庞小雄，梁松庆，钟兆健，等.HPLC法测定拈痛丸中橙皮苷的含量[J].中药材，2007，30（6）：734-735.