【摘 要】
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目的 研究针对中国主要HIV-1流行株优化的实验室自建耐药基因型实验室自建检测方法( in-house)的扩增效果及检测敏感度.方法 选取中国主要流行亚型的B、CRF07 _BC、CRF01_AE
【机 构】
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中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病国家重点实验室,上海市疾病预防控制中心
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目的 研究针对中国主要HIV-1流行株优化的实验室自建耐药基因型实验室自建检测方法( in-house)的扩增效果及检测敏感度.方法 选取中国主要流行亚型的B、CRF07 _BC、CRF01_AE亚型各10份样本,这些样本为2007 -2009年本实验室采集采自河南、新疆、湖南三地已接受抗病毒治疗患者的样本,并已确定亚型.选用生物梅里埃公司的Nuclisens Easy Q方法对选取的30份样本的病毒载量平行进行3次病毒载量检测,取平均值作为载量数值.对每份样本用HIV阴性血浆进行5个浓度的梯度稀释,稀释为＞ 1000、401～1000、101 ～400、50 ～100和＜50拷贝/ml 5个浓度梯度.提取核酸后,进行RT-PCR和巢式PCR扩增,对扩增结果进行统计扩增结果,确定每种亚型的扩增效果和最低检测限.随机选取12份样本的初浓度和最低浓度进行测序,对测序结果进行耐药结果分析和序列一致性分析.结果 所选样本的病毒载量介于2.03×102 ～5.92×104拷贝/ml之间.自建的In-house法对载量50 ～1000拷贝/ml范围的样本仍可达到较高的扩增效果(86％).样本稀释前后耐药位点相似,序列一致性在97％以上,在低病毒载量时优势病毒株的检测则更敏感.结论 自建的实验室方法的灵敏度较高,对低病毒载量水平的样本仍有较高的扩增效果.
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