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摘要：目的 优选口炎清颗粒的提取和制粒工艺。方法 采用高效液相色谱法测定口炎清浸膏中芍药苷含量。以浸膏收率、芍药苷提取率为评价指标，用单因素试验和正交试验优化提取工艺。以吸湿率、堆密度、休止角为评价指标，采用多因素比较法和正交试验优化制粒工艺，并测定口炎清颗粒的临界相对湿度。结果 最佳提取工艺为12倍60%乙醇回流提取3次，每次2 h。口炎清浸膏粉与糊精按6∶4比例混合后用90%乙醇制粒，制得的口炎清颗粒吸湿性小，流动性好，临界相对湿度约为63%。结论 口炎清颗粒的提取和制粒工艺合理可行，稳定性好，可为工业化生产提供依据。
关键词：口炎清颗粒；高效液相色谱法；提取工艺；正交试验；制粒工艺
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0060-05
口炎清颗粒为本院开发的中药汤剂，由赤芍、葛根、石斛、麦冬等组成，功效清热凉血、生津养阴，用于扁平苔藓等口腔疾病的治疗。汤剂味苦，患者依从性差，且久储易酸败，不易携带，为此，我们将其制成胶囊剂。为保证制剂质量，合理制定制备工艺，本试验对提取和制粒工艺进行优选。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）， HWS24型电热恒温水浴锅（上海科技一恒有限公司），RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），CS101-2ABN型电热鼓风干燥箱（重庆市永生实验仪器厂），KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），BS224S电子天平（德国 Sartorius公司）。
口炎清颗粒处方药材购于重庆桐君阁中药材批发公司，经重庆医科大学药学院刘新教授鉴定为正品，均符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）项下有关规定。芍药苷对照品（批号110736-201136，中国食品药品检定研究院），淀粉（批号20120201，曲阜市药用辅料有限公司），乳糖（批号20120101，湖南尔康药用辅料有限公司），糊精（批号20120301，曲阜市药用辅料有限公司），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 芍药苷含量测定
2.1.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex-C18柱（150 mm×4.6 mm， 10 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；检测波长：229 nm；流速：1 mL/min；柱温：室温；进样量：20 ?L。理论塔板数按芍药苷峰计不低于3 000。
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.5 mg/mL的对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备 取口炎清浸膏粉2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加40 mL甲醇，超声处理30 min，冷却至室温，加甲醇至刻度，振摇，过滤，即得供试品溶液。
2.1.4 阴性对照溶液的制备 按处方量取除赤芍的各味药材，60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取粉末2 g，按“2.1.3”项下方法制成缺赤芍的阴性对照溶液。
2.1.5 专属性考察 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液20 ?L，注入液相色谱仪，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录色谱图。结果表明，供试品溶液在与对照品溶液相应保留时间处呈相同的色谱峰，而阴性对照溶液在相应的保留时间处无吸收峰出现，对测定无干扰。色谱图见图1。
2.1.6 标准曲线制备 精密吸取0.5 mg/mL芍药苷对照溶液0.1、0.5、1.5、2.5、4.5 mL置5 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别为0.01、0.05、0.15、0.25、0.45 mg/mL的溶液。分别吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=13 997X-52.45（r=0.999 9），表明芍药苷浓度在0.01～0.45 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
2.1.7 精密度考察 精密吸取芍药苷对照品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，1日内重复进样6次，测定日内精密度，芍药苷峰面积RSD=0.75%；连续测定4 d，芍药苷峰面积RSD=0.68%。
2.1.8 稳定性考察 精密吸取供试品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，测定，记录峰面积。结果芍药苷峰面积RSD=0.88%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.1.9 重复性考察 取口炎清浸膏粉5份，按“2.1.3”项下方法制备溶液，精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。芍药苷峰面积RSD=1.15%。
2.1.10 加样回收率试验 取已知芍药苷含量的口炎清浸膏粉0.1 g共9份，分别置10 mL容量瓶中，加入0.5 mg/mL的芍药苷对照品溶液1.0、1.2、1.5 mL，按“2.1.3”项下方法制备低、中、高3种浓度的溶液，分别精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.69%，RSD=0.62%。
2.2 芍药苷提取率的测定
取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积，用与提取相应乙醇定容至500 mL，取100 mL，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取口炎清浸膏粉，按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算芍药苷提取率。芍药苷提取率（%）=100 mL提取液中芍药苷量×5/药材中芍药苷量。 2.3 浸膏收率的测定
按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[1]浸出物测定法进行测定。取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积（V），精密吸取10 mL置恒重后的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣置恒温烘箱中，105 ℃干燥3 h，取出，干燥器内冷却30 min，精密称定质量，计算浸膏收率。浸膏收率（%）=W1×V/（W2×10）×100%。其中W1为浸膏质量（g），V为药液总体积（mL），10为所吸取药液总体积（mL），W2为提取所用药材总量（g）。
2.4 单因素考察
2.4.1 提取方法考察 取处方量全部药材2份，分别采用8倍量60%乙醇回流提取和冷浸提取2次，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，回流提取法浸膏收率和芍药苷提取率均优于冷浸法。结果见表1。
2.4.2 提取溶媒考察 取处方量全部药材2份，分别用8倍量水和60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明2种溶剂对浸膏收率无明显影响，但60%乙醇回流提取的芍药苷提取效率明显优于水提。结果见表2。
2.4.3 乙醇浓度考察 取处方量全部药材6份，分别用8倍量20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，乙醇浓度在60%以下对浸膏收率影响不显著，60%乙醇作溶剂时芍药苷提取率最高。结果见表3。
2.4.4 乙醇用量考察 取处方量全部药材5份，分别用 4、8、10、12、14倍量60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，乙醇用量显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。结果见表4。
2.4.5 提取次数考察 取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇分别回流提取1、2、3、4、5次，每次1 h，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，提取次数显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。见表5。
2.4.6 提取时间考察 取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇回流提取1次，每次1、2、3、4、5 h，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，提取时间显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。结果见表6。
2.5 正交试验优选提取工艺
2.5.1 因素水平设计 在单因素试验的基础上，选择采用60%乙醇回流提取，选定显著影响浸膏收率和芍药苷提取率的3个主要因素：提取次数（A）、提取时间（B）、乙醇用量（C），每个因素选择3个水平，以浸膏收率和芍药苷提取率为评价指标，按照L9（34）正交表安排试验。因素水平见表7。
2.5.2 正交试验结果 取处方量全部药材9份（总质量268.5 g），按正交表安排试验。提取，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。试验设计及结果见表8，方差分析见表9、表10。
2.5.3 结果分析 由直观分析结果可见，各因素对浸膏得率的影响效果顺序为A>C>B，优选水平组合为A1B3C3；各因素对芍药苷提取率的影响效果顺序亦为A>C>B，优选水平组合为A1B3C3。方差分析结果表明，因素A、B、C均显著影响浸膏得率和芍药苷提取率（P<0.05）。但因素B的2、3水平对浸膏收率和芍药苷提取率影响差异不大，考虑成本因素综合分析，最后确定提取工艺为A1B2C3，即12倍60%乙醇回流提取3次，每次2 h。
2.5.4 验证试验 取处方量全部药材3份，按最佳提取工艺制备3批浸膏，结果表明该工艺稳定可行。结果见表11。
2.6 吸湿百分率的测定
将底部盛有氯化钠过饱和溶液的干燥器，放入25 ℃恒温箱内，平衡24 h，使干燥器内相对湿度达到75%。取口炎清颗粒置五氧化二磷干燥器内干燥48 h，平铺于已恒重的称量瓶底部，厚度约为2 mm，精密称定后置上述干燥器内（称量瓶盖打开），放入25 ℃恒温箱内，于0、6、12、24、48、72 h称定质量，计算吸湿率。吸湿率（%）=吸湿后质量-吸湿前质量/吸湿前质量×100%[2]。
2.7 堆密度
采用量筒法测定堆密度。取口炎清颗粒5 g，精密称定，置量筒中，手持量筒由5 cm高处落在塑胶板上，反复5次，测定容积，共测定5次，计算堆密度。堆密度=口炎清颗粒质量（g）/容积（mL）[3]。
2.8 休止角
取半径（R）为40 mm的平底圆皿，将漏斗固定于三角架上，下端正对平底圆皿的圆心，高15 cm。取口炎清颗粒使之从漏斗上自然流下，至锥形周边到平底圆皿边缘为止，测定锥体高度（H）。计算公式tgα=H/R[4]。
2.9 辅料的筛选
取口炎清浸膏粉适量，分别与乳糖、糊精、淀粉按不同比例混匀，80%乙醇制成软材，70 ℃烘干，得口炎清颗粒。取口炎清颗粒，按“2.6”、“2.7”、“2.8”项下方法测定吸湿率、堆密度及休止角。结果表明，辅料能显著降低颗粒吸湿性，增加流动性。其中以乳糖最为显著，糊精与乳糖差别不大。见表12。综合考虑生产成本，选用糊精作为辅料进一步优选。
2.10 正交试验优选制粒工艺
2.10.1 因素水平设计 在预试验的基础上，确定口炎清浸膏粉与糊精比例（A）、乙醇体积分数（B）、乙醇用量（C）为考察因素，每个因素选择3个水平，以口炎清颗粒得率为指标，按照L9（34）正交表安排试验。结果见表13。 2.10.2 正交试验结果分析 按正交表安排试验，按比例取口炎清浸膏粉和糊精，混合，加入乙醇制成软材，制粒，70 ℃烘干，得口炎清颗粒，称定质量，计算口炎清颗粒收率。颗粒收率（%）=口炎清颗粒质量/口炎清浸膏粉和糊精质量×100%。试验设计及结果见表14，方差分析见表15。
2.10.3 结果分析 由直观分析结果看出，各因素对颗粒得率的影响顺序为A>B>C，即口炎清浸膏粉与糊精比例对口炎清颗粒收率影响最大，其次是乙醇体积分数，最后为乙醇用量，优选水平组合为A3B3C2。由方差分析可知，口炎清浸膏粉与糊精比例对口炎清颗粒收率有显著影响（P<0.05），最后确定最佳制粒工艺为A3B3C2。即口炎清颗粒与糊精按6∶4比例混合后，用90%乙醇制粒，乙醇用量为0.14 mL/g。
2.10.4 验证试验 取口炎清浸膏粉与糊精，按最佳制粒工艺制备3批口炎清颗粒，计算测定颗粒收率，测定吸湿率、堆密度、休止角，结果表明该工艺稳定。见表16。
2.11 临界相对湿度的测定
取口炎清颗粒（批号20120523），置五氧化二磷干燥器内干燥至恒重，平铺于已恒重的称量瓶中，厚度约为2 mm，精密称定，分别放于不同湿度的干燥器内（称量瓶盖打开），25 ℃恒温箱中放置7 d，取出，精密称定质量，计算吸湿率。结果见表17。
以相对湿度为横坐标，吸湿率为纵坐标，绘制吸湿平衡曲线图。对曲线的两端做切线，两切线交点对应的横坐标即为临界相对湿度。由图2可知，口炎清颗粒的临界相对湿度约为63%。
3 讨论
本试验比较了多种流动相（乙腈-0.02 moL/L磷酸二氢钠、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.5%三乙胺水、甲醇-0.4%磷酸、甲醇-0.05 moL/L磷酸二氢钾）的分离效果，结果乙腈-0.1%磷酸的分离效果最为理想，芍药苷色谱峰的保留时间适当，分离度高，重复性好。
中药浸膏易吸湿，吸湿性的大小与提取工艺、药材成分等密切相关。一般醇提所得浸膏易吸潮，给后期工艺操作带来不便，尤其是含有大量糖类、黏液质、油脂类成分的处方，更不易制备成型[5]。本试验采用60%乙醇提取所得浸膏，有较强吸湿性。研究表明，药物吸湿的原因是因为药物中存在能与水分子羟基结合的极性基团[6]。加入一定量辅料可以降低药物中吸湿基团的浓度，起到稀释作用，从而达到降低吸湿的目的。本试验结果表明，将一定量的辅料与浸膏粉混合制粒，可不同程度降低浸膏的吸湿性。不同浸膏与辅料组合的比例应根据具体工艺考察，以得到最佳配比。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅩC.
[2] 陈绪龙，赵国巍，廖正根，等.不同粒径三七粉体物理特性及体外溶出行为的比较[J].中华中医药杂志，2011，26（9）：1971-1974.
[3] 廖正根，陈绪龙，赵国巍，等.超微粉碎对骨碎补理化性质的影响[J].中草药，2011，42（3）：461-465.
[4] 王丽，高家荣，韩燕全，等.养肝益水颗粒成型工艺[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（1）：32-35.
[5] 王娟，刘汉清.通脉颗粒的成型工艺研究[J].中药材，2006，29（7）：724-726.
[6] 肖琼，沈平姨，朱莲华.中药固体制剂防潮技术与辅料应用的研究[J].中成药，2007，29（2）：208.
（收稿日期：2012-11-13，编辑：陈静）
关键词：口炎清颗粒；高效液相色谱法；提取工艺；正交试验；制粒工艺
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0060-05
口炎清颗粒为本院开发的中药汤剂，由赤芍、葛根、石斛、麦冬等组成，功效清热凉血、生津养阴，用于扁平苔藓等口腔疾病的治疗。汤剂味苦，患者依从性差，且久储易酸败，不易携带，为此，我们将其制成胶囊剂。为保证制剂质量，合理制定制备工艺，本试验对提取和制粒工艺进行优选。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）， HWS24型电热恒温水浴锅（上海科技一恒有限公司），RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），CS101-2ABN型电热鼓风干燥箱（重庆市永生实验仪器厂），KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），BS224S电子天平（德国 Sartorius公司）。
口炎清颗粒处方药材购于重庆桐君阁中药材批发公司，经重庆医科大学药学院刘新教授鉴定为正品，均符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）项下有关规定。芍药苷对照品（批号110736-201136，中国食品药品检定研究院），淀粉（批号20120201，曲阜市药用辅料有限公司），乳糖（批号20120101，湖南尔康药用辅料有限公司），糊精（批号20120301，曲阜市药用辅料有限公司），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 芍药苷含量测定
2.1.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex-C18柱（150 mm×4.6 mm， 10 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；检测波长：229 nm；流速：1 mL/min；柱温：室温；进样量：20 ?L。理论塔板数按芍药苷峰计不低于3 000。
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.5 mg/mL的对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备 取口炎清浸膏粉2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加40 mL甲醇，超声处理30 min，冷却至室温，加甲醇至刻度，振摇，过滤，即得供试品溶液。
2.1.4 阴性对照溶液的制备 按处方量取除赤芍的各味药材，60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取粉末2 g，按“2.1.3”项下方法制成缺赤芍的阴性对照溶液。
2.1.5 专属性考察 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液20 ?L，注入液相色谱仪，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录色谱图。结果表明，供试品溶液在与对照品溶液相应保留时间处呈相同的色谱峰，而阴性对照溶液在相应的保留时间处无吸收峰出现，对测定无干扰。色谱图见图1。
2.1.6 标准曲线制备 精密吸取0.5 mg/mL芍药苷对照溶液0.1、0.5、1.5、2.5、4.5 mL置5 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别为0.01、0.05、0.15、0.25、0.45 mg/mL的溶液。分别吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=13 997X-52.45（r=0.999 9），表明芍药苷浓度在0.01～0.45 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
2.1.7 精密度考察 精密吸取芍药苷对照品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，1日内重复进样6次，测定日内精密度，芍药苷峰面积RSD=0.75%；连续测定4 d，芍药苷峰面积RSD=0.68%。
2.1.8 稳定性考察 精密吸取供试品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，测定，记录峰面积。结果芍药苷峰面积RSD=0.88%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.1.9 重复性考察 取口炎清浸膏粉5份，按“2.1.3”项下方法制备溶液，精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。芍药苷峰面积RSD=1.15%。
2.1.10 加样回收率试验 取已知芍药苷含量的口炎清浸膏粉0.1 g共9份，分别置10 mL容量瓶中，加入0.5 mg/mL的芍药苷对照品溶液1.0、1.2、1.5 mL，按“2.1.3”项下方法制备低、中、高3种浓度的溶液，分别精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.69%，RSD=0.62%。
2.2 芍药苷提取率的测定
取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积，用与提取相应乙醇定容至500 mL，取100 mL，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取口炎清浸膏粉，按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算芍药苷提取率。芍药苷提取率（%）=100 mL提取液中芍药苷量×5/药材中芍药苷量。 2.3 浸膏收率的测定
按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[1]浸出物测定法进行测定。取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积（V），精密吸取10 mL置恒重后的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣置恒温烘箱中，105 ℃干燥3 h，取出，干燥器内冷却30 min，精密称定质量，计算浸膏收率。浸膏收率（%）=W1×V/（W2×10）×100%。其中W1为浸膏质量（g），V为药液总体积（mL），10为所吸取药液总体积（mL），W2为提取所用药材总量（g）。
2.4 单因素考察
2.4.1 提取方法考察 取处方量全部药材2份，分别采用8倍量60%乙醇回流提取和冷浸提取2次，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，回流提取法浸膏收率和芍药苷提取率均优于冷浸法。结果见表1。
2.4.2 提取溶媒考察 取处方量全部药材2份，分别用8倍量水和60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明2种溶剂对浸膏收率无明显影响，但60%乙醇回流提取的芍药苷提取效率明显优于水提。结果见表2。
2.4.3 乙醇浓度考察 取处方量全部药材6份，分别用8倍量20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，乙醇浓度在60%以下对浸膏收率影响不显著，60%乙醇作溶剂时芍药苷提取率最高。结果见表3。
2.4.4 乙醇用量考察 取处方量全部药材5份，分别用 4、8、10、12、14倍量60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，乙醇用量显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。结果见表4。
2.4.5 提取次数考察 取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇分别回流提取1、2、3、4、5次，每次1 h，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，提取次数显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。见表5。
2.4.6 提取时间考察 取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇回流提取1次，每次1、2、3、4、5 h，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，提取时间显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。结果见表6。
2.5 正交试验优选提取工艺
2.5.1 因素水平设计 在单因素试验的基础上，选择采用60%乙醇回流提取，选定显著影响浸膏收率和芍药苷提取率的3个主要因素：提取次数（A）、提取时间（B）、乙醇用量（C），每个因素选择3个水平，以浸膏收率和芍药苷提取率为评价指标，按照L9（34）正交表安排试验。因素水平见表7。
2.5.2 正交试验结果 取处方量全部药材9份（总质量268.5 g），按正交表安排试验。提取，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。试验设计及结果见表8，方差分析见表9、表10。
2.5.3 结果分析 由直观分析结果可见，各因素对浸膏得率的影响效果顺序为A>C>B，优选水平组合为A1B3C3；各因素对芍药苷提取率的影响效果顺序亦为A>C>B，优选水平组合为A1B3C3。方差分析结果表明，因素A、B、C均显著影响浸膏得率和芍药苷提取率（P<0.05）。但因素B的2、3水平对浸膏收率和芍药苷提取率影响差异不大，考虑成本因素综合分析，最后确定提取工艺为A1B2C3，即12倍60%乙醇回流提取3次，每次2 h。
2.5.4 验证试验 取处方量全部药材3份，按最佳提取工艺制备3批浸膏，结果表明该工艺稳定可行。结果见表11。
2.6 吸湿百分率的测定
将底部盛有氯化钠过饱和溶液的干燥器，放入25 ℃恒温箱内，平衡24 h，使干燥器内相对湿度达到75%。取口炎清颗粒置五氧化二磷干燥器内干燥48 h，平铺于已恒重的称量瓶底部，厚度约为2 mm，精密称定后置上述干燥器内（称量瓶盖打开），放入25 ℃恒温箱内，于0、6、12、24、48、72 h称定质量，计算吸湿率。吸湿率（%）=吸湿后质量-吸湿前质量/吸湿前质量×100%[2]。
2.7 堆密度
采用量筒法测定堆密度。取口炎清颗粒5 g，精密称定，置量筒中，手持量筒由5 cm高处落在塑胶板上，反复5次，测定容积，共测定5次，计算堆密度。堆密度=口炎清颗粒质量（g）/容积（mL）[3]。
2.8 休止角
取半径（R）为40 mm的平底圆皿，将漏斗固定于三角架上，下端正对平底圆皿的圆心，高15 cm。取口炎清颗粒使之从漏斗上自然流下，至锥形周边到平底圆皿边缘为止，测定锥体高度（H）。计算公式tgα=H/R[4]。
2.9 辅料的筛选
取口炎清浸膏粉适量，分别与乳糖、糊精、淀粉按不同比例混匀，80%乙醇制成软材，70 ℃烘干，得口炎清颗粒。取口炎清颗粒，按“2.6”、“2.7”、“2.8”项下方法测定吸湿率、堆密度及休止角。结果表明，辅料能显著降低颗粒吸湿性，增加流动性。其中以乳糖最为显著，糊精与乳糖差别不大。见表12。综合考虑生产成本，选用糊精作为辅料进一步优选。
2.10 正交试验优选制粒工艺
2.10.1 因素水平设计 在预试验的基础上，确定口炎清浸膏粉与糊精比例（A）、乙醇体积分数（B）、乙醇用量（C）为考察因素，每个因素选择3个水平，以口炎清颗粒得率为指标，按照L9（34）正交表安排试验。结果见表13。 2.10.2 正交试验结果分析 按正交表安排试验，按比例取口炎清浸膏粉和糊精，混合，加入乙醇制成软材，制粒，70 ℃烘干，得口炎清颗粒，称定质量，计算口炎清颗粒收率。颗粒收率（%）=口炎清颗粒质量/口炎清浸膏粉和糊精质量×100%。试验设计及结果见表14，方差分析见表15。
2.10.3 结果分析 由直观分析结果看出，各因素对颗粒得率的影响顺序为A>B>C，即口炎清浸膏粉与糊精比例对口炎清颗粒收率影响最大，其次是乙醇体积分数，最后为乙醇用量，优选水平组合为A3B3C2。由方差分析可知，口炎清浸膏粉与糊精比例对口炎清颗粒收率有显著影响（P<0.05），最后确定最佳制粒工艺为A3B3C2。即口炎清颗粒与糊精按6∶4比例混合后，用90%乙醇制粒，乙醇用量为0.14 mL/g。
2.10.4 验证试验 取口炎清浸膏粉与糊精，按最佳制粒工艺制备3批口炎清颗粒，计算测定颗粒收率，测定吸湿率、堆密度、休止角，结果表明该工艺稳定。见表16。
2.11 临界相对湿度的测定
取口炎清颗粒（批号20120523），置五氧化二磷干燥器内干燥至恒重，平铺于已恒重的称量瓶中，厚度约为2 mm，精密称定，分别放于不同湿度的干燥器内（称量瓶盖打开），25 ℃恒温箱中放置7 d，取出，精密称定质量，计算吸湿率。结果见表17。
以相对湿度为横坐标，吸湿率为纵坐标，绘制吸湿平衡曲线图。对曲线的两端做切线，两切线交点对应的横坐标即为临界相对湿度。由图2可知，口炎清颗粒的临界相对湿度约为63%。
3 讨论
本试验比较了多种流动相（乙腈-0.02 moL/L磷酸二氢钠、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.5%三乙胺水、甲醇-0.4%磷酸、甲醇-0.05 moL/L磷酸二氢钾）的分离效果，结果乙腈-0.1%磷酸的分离效果最为理想，芍药苷色谱峰的保留时间适当，分离度高，重复性好。
中药浸膏易吸湿，吸湿性的大小与提取工艺、药材成分等密切相关。一般醇提所得浸膏易吸潮，给后期工艺操作带来不便，尤其是含有大量糖类、黏液质、油脂类成分的处方，更不易制备成型[5]。本试验采用60%乙醇提取所得浸膏，有较强吸湿性。研究表明，药物吸湿的原因是因为药物中存在能与水分子羟基结合的极性基团[6]。加入一定量辅料可以降低药物中吸湿基团的浓度，起到稀释作用，从而达到降低吸湿的目的。本试验结果表明，将一定量的辅料与浸膏粉混合制粒，可不同程度降低浸膏的吸湿性。不同浸膏与辅料组合的比例应根据具体工艺考察，以得到最佳配比。
参考文献：
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[3] 廖正根，陈绪龙，赵国巍，等.超微粉碎对骨碎补理化性质的影响[J].中草药，2011，42（3）：461-465.
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[5] 王娟，刘汉清.通脉颗粒的成型工艺研究[J].中药材，2006，29（7）：724-726.
[6] 肖琼，沈平姨，朱莲华.中药固体制剂防潮技术与辅料应用的研究[J].中成药，2007，29（2）：208.
（收稿日期：2012-11-13，编辑：陈静）