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【摘要】 目的：探讨EGFR、Ki67和P16在宫颈鳞状上皮内病变（SIL）分级中的应用。方法：应用免疫组化SP法标记60例宫颈鳞状上皮化生、70例低级别宫颈上皮内病变（LSIL）和80例高级别宫颈上皮内病变（HSIL）中EGFR、Ki67和P16的表达。结果：EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05），且均以HSIL为最高，LSIL次之，鳞状上皮化生为最低。EGFR、Ki67和P16在LSIL、HSIL中的表达模式比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。相关性分析显示，EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生与LSIL中蛋白表达两两比较，均无明显相关（P>0.05），EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生与HSIL中蛋白表达两两比较，均无明显相关（P>0.05），EGFR、Ki67和P16在LSIL与HSIL中蛋白表达两两比较，均呈正相关（P<0.05）。结论：应用免疫组化SP法标记三种蛋白可作为SIL分级的参考指标，同时结合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假阳性率，提高诊断分级的准确性。
【关键词】 EGFR； Ki67； P16； 宫颈鳞状上皮内病变； 分级
【Abstract】 Objective：To explore the application of EGFR and Ki67 and P16 staining in hierarchical diagnostic of squamous intraepithelial lesions（SIL）.Method：The SP immunohistochemical method was used to mark the 60 cases of cervical squamous metaplasia，70 cases of low-grade cervical intraepithelial neoplasia（LSIL） and 80 cases of high grade cervical intraepithelial lesions（HSIL） in EGFR，Ki67 and P16 expression.Result：The expression of EGFR，Ki67 and P16 in squamous metaplasia，LSIL and HSIL were compared，the differences were statistically significant（P<0.05），and the highest was HSIL，followed by the LSIL，and the lowest was metaplasia of squamous epithelium.EGFR，Ki67 and P16 in LSIL，compared the expression pattern of HSIL，the differences were statistically significant（P<0.05）.Correlation analysis showed that EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in LSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05），EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05）EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL and LSIL compared with each other，all had positive correlations（P<0.05）.Conclusion：The SP immunohistochemical method is used to mark the three proteins can be used as reference for SIL classification，at the same time，combined with the distribution of LSIL and HSIL，in order to reduce the false positive rate，improve the diagnostic accuracy of classification.
【Key words】 EGFR； Ki67； P16； Squamous intraepithelial lesions； Hierarchical diagnostic
First-author’s address：Chinese Medicine Hospital of Meizhou City，Meizhou 514017，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.21.003
隨着宫颈癌的相关研究不断深入，已被证实从人乳头状瘤病毒感染到高、低级别宫颈上皮内病变直至原发性宫颈癌发病为一个连续的发展过程[1-2]，其中高、低级别宫颈上皮内病以宫颈鳞状上皮内构形不正常及细胞异型增生为特征，是宫颈鳞状上皮的癌前病变[3-4]。同时，既往研究指出低级别宫颈上皮内病变（LSIL）可给予适当的治疗抑制其进展，且消退率较高，而高级别宫颈上皮内病变（HSIL）则较难通过治疗使其发生逆转，所以较大比率病例进展为宫颈癌，故准确的诊断分级对改善患者预后具有重要的意义[5-6]。本研究联合检测EGFR、Ki67和P16在宫颈鳞状上皮化生、LSIL及HSIL中的表达情况，旨在探讨EGFR、Ki67和P16在宫颈鳞状上皮内病变分级中的应用，现报道如下。 1 资料与方法
1.1 一般资料 所有组织标本均来自梅州市人民医院2014年1月-2015年12月首次宫颈活检手术的石蜡包埋组织，宫颈肿瘤组织学分类标准参照2014年宫颈上皮内病变WHO分级标准[7]，病理诊断由课题组成员分别阅片后共同确诊，排除放化疗史、免疫治疗史及子宫疾病史，其中60例宫颈鳞状上皮化生、70例LSIL及80例HSIL。60例宫颈鳞状上皮化生，年龄21～72岁，平均（41.26±7.16）岁；70例LSIL，年龄22～71岁，
平均（42.17±6.35）岁；80例HSIL，年龄24～67岁，平均（39.88±6.98）岁。三组标本的患者的年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法 本组标本用4%福尔马林固定，脱水，石蜡包埋，切片机切片4 μm，SP法免疫组化染色，EGFR标记采用鼠抗人EGFR单克隆抗体、P16标记采用鼠抗人P16单克隆抗体、Ki67标记采用鼠抗人Ki67单克隆抗体，试剂盒均来自福州迈新生物公司，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗为阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照。
1.3 结果判定标准 EGFR定位于细胞膜或细胞浆，P16定位在细胞核和/或胞浆，Ki67定位在细胞核，均以光镜下观察显示棕黄色纳入为阳性细胞，均以无阳性细胞或阳性细胞数<5%纳入为阴性，阳性细胞数≥5%纳入为阳性，同时将阳性组织分为3个等级：5%～25%纳入为（+），>25%～50%纳入为（++），>50%纳入为（+++）。
1.4 统计学处理 所有数据均经SPSS 20.0统计学软件进行统计学分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验或F检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验或Z检验，采用Pearson相关分析方法分析EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理类型宫颈组织之间表达的相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同病理类型宫颈组织中EGFR、Ki67和P16蛋白的表达 EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生中阳性率分别为16.66%、13.33%、15.00%，在LSIL中阳性率分别为30.00%、80.00%、77.14%，在HSIL中阳性率分别为76.25%、80.00%、98.75%。EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05），且均以HSIL为最高，LSIL次之，鳞状上皮化生为最低，见表1。
2.2 EGFR、Ki67和P16蛋白在LSIL、HSIL中的表达模式 EGFR、Ki67和P16在LSIL、HSIL中的表达模式比较，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。
2.3 EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理类型宫颈组织中蛋白表达的相关性 相关性分析显示，EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生与LSIL中蛋白表达两两比较，均无明显相关（r=0.11、0.08、0.09，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生与HSIL中蛋白表达两两比较，均无明显相关（r=0.10、0.08、0.08，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在LSIL与HSIL中蛋白表达两两比较，均呈正相关（r=0.35、0.48、0.47，P<0.05）。
3 讨论
人乳头状瘤病毒感染是宫颈癌发病的主要致病因素，这与感染后导致宿主癌基因被激活的一系列机制有关，诸如：人乳头状瘤病毒的E6、E7基因可整合于宿主的基因组内，分别引起P53、Rb蛋白的异常表达，进而引起Ki67、P16蛋白的异常表达；EGFR是原癌基因c-erb B-1的表达产物，是信号传导、细胞周期调控的关键分子[8-10]。既往研究显示，P16基因以缺失、突变方式广泛参与肿瘤形成，如直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，其失活可能导致细胞恶性增殖[11-12]。Ki67是一种核增殖抗体，表达于GO期以外处于其他细胞周期的细胞，可作为细胞增殖标记物用于肿瘤和反应性增生病变的鉴别[13-14]。EGFR与其受体结合可促进细胞的增殖分化并加速细胞的恶性转化，与肿瘤的组织学分型密切相关，已在为胃癌、乳腺癌的诊断中被应用[15-16]。故本研究选取EGFR、Ki67和P16蛋白作为宫颈鳞状上皮内病变的标记物。同时，选取EGFR、Ki67和P16蛋白作为宫颈鳞状上皮化生的标记物，宫颈鳞状上皮化生在组织学中于SIL相似、易混淆[17-21]，以作对照。
本研究结果表明，EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05），且均以HSIL为最高，LSIL次之，鳞状上皮化生为最低，丛玲华等[20]、姚秀华等[21]的研究有过类似报道，本研究与其持有类似观点，其指出，三种蛋白在宫颈鳞状上皮化生等良性病变中几乎呈阴性，而在LSIL和HSIL中呈阳性，且随病情进展而阳性强度增高，提示三种蛋白在高表达与宫颈癌的发展密切关系。但这并不足以用于宫颈鳞状上皮内病变诊断分级。同時，本研究光镜下观察到宫颈鳞状上皮化生中EGFR、Ki67和P16较LSIL及HSIL阳性细胞数目少，LSIL中EGFR较Ki67和P16阳性细胞数目少，LSIL中EGFR、Ki67和P16较HSIL阳性细胞数目少，且主要分布于基底层，HSIL中EGFR、Ki67和P16较本组上述组织阳性细胞数目多，且阳性细胞主要分布于上皮下2/3层以上及呈弥漫性分布。由此，可见LSIL及HSIL中EGFR、Ki67和P16阳性数目随病情进展而增加，且阳性细胞分布也随之改变。本研究显示，EGFR、Ki67和P16在LSIL与HSIL中蛋白表达两两比较均呈正相关（P<0.05）。提示，宫颈癌的进展与多基因调控密切相关。故联合检测EGFR、Ki67和P16在LSIL和HSIL中的蛋白表达，同时结合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假阳性率，提高诊断分级的准确性。 综上所述，EGFR、Ki67和P16可能参与到了宫颈癌的发生、发展，应用免疫组化SP法标记三种蛋白可作为SIL分级的参考指标，同时结合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假阳性率，提高诊断分级的准确性。
参考文献
[1]程静，潘光鑫，周素，等.宫颈癌发病机制的探讨[J].中国妇幼保健，2014，29（28）：4545-4547.
[2]姜兰，李娟，王钰.保妇康栓治疗宫颈HPV感染的疗效观察[J].中国医学创新，2012，9（1）：43-44.
[3]常柏峰，赵琳琳，周彬，等.宫颈非典型腺细胞液基细胞学诊断的临床意义探讨[J].诊断病理学杂志，2016，23（2）：89-92.
[4]马亚琪，刘爱军.宫颈癌及癌前病变病理诊断及研究进展[J].实用妇产科杂志，2015，31（11）：803-805.
[5]陈观娣，钱德英，岑坚敏，等.宫颈高度鳞状上皮内病变治疗后高危型人乳头瘤病毒的消退规律[J].中国实用妇科与产科杂志，2011，27（1）：42-44.
[6]朱月琴，赵楠，夏岩，等.不同术式治疗宫颈鳞状上皮病变临床病理研究[J].中华肿瘤防治杂志，2017，24（1）：51-54.
[7]沈丹华.解读第4版WHO（2014）女性生殖系统肿瘤分类中宫颈癌前期病变的命名及分级变化[J].诊断病理学杂志，2015，22（3）：129-132.
[8]张蔚，刘珍，胡晓霞，等.宫颈癌中异常表达microRNA与HPV-16 E6/E7基因相关性分析[J].中华实用诊断与治疗杂志，2016，30（2）：120-123.
[9]殷复粉，王宁，于啸，等.宫颈癌细胞系中HPV16E6，E7及E6/E7基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响[J].中国癌症杂志，2015，25（9）：641-651.
[10] Feng W，Duan X，Liu J，et al.Morphoproteomic evidence of constitutively activated and overexpressed mTOR pathway in cervical squamous carcinoma and high grade squamous intraepithelial lesions[J].Int J Clin Exp Pathol，2009，2（3）：249-260.
[11]郑伟，武正炎.表皮生长因子受体、C-erbB-2原癌基因在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌骨髓微小转移的关系[J].南京医科大学学报（自然科学版），2000，20（1）：7-10.
[12]宋玉华，宋三泰，江泽飞，等.原癌基因Fra-1高表达与乳腺癌细胞转移表型的关系[J].西安交通大学学报：医学版，2008，29（2）：171-175.
[13] Ikenberg H，Bergeron C，Schmidt D，et al.Screening for cervical cancer precursors with p16/Ki-67 dual-stained cytology：results of the PALMS study[J].JNCI：Journal of the National Cancer Institute，2013，105（20）：1550-1557.
[14]遲秋君，梁冠盈，付瑶，等.子宫颈癌有无HPV感染和PCNA，Ki-67，p53表达与临床病理变化相关性分析[J].实用肿瘤学杂志，2014，28（2）：108-113.
[15]汤永峰，谢莉莉，冯晓敏，等.PTEN，p53和EGFR在乳腺癌中的表达与临床意义[J].现代肿瘤医学，2014，22（2）：345-349.
[16]董晨，李红.胃癌组织中Lrig1与EGFR基因表达[J].中国公共卫生，2015，31（6）：819-822.
[17]贠世娟，赵素香，徐辉.宫颈活检病理诊断与细胞学涂片结果不符的探讨[J].中国医学创新，2014，11（11）：139-141.
[18]丁伟山，宋贞荣.宫颈不成熟鳞状上皮化生52例分析[J].现代医药卫生，2012，28（2）：214-215.
[19]贾薇，潘晓琳，陆天才，等.子宫颈非典型不成熟鳞状上皮化生与子宫颈鳞状上皮内瘤变Ⅲ级形态学及增殖分化特征比较[J].临床与实验病理学杂志，2008，24（4）：423-428.
[20]丛玲华，戴珍珍，方来福，等.EGFR，P16，Ki67和P53在宫颈鳞状上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌中表达的临床意义[J].中国现代医生，2013，51（2）：87-90.
[21]姚秀华，黄卓敏，王耀楷，等.年轻妇女宫颈鳞状上皮内病变、宫颈癌组织中P16InK4a和Ki-67的表达及其预测作用[J].中国计划生育学杂志，2016，24（2）：111-113.
（收稿日期：2017-06-09） （本文编辑：张爽）
【关键词】 EGFR； Ki67； P16； 宫颈鳞状上皮内病变； 分级
【Abstract】 Objective：To explore the application of EGFR and Ki67 and P16 staining in hierarchical diagnostic of squamous intraepithelial lesions（SIL）.Method：The SP immunohistochemical method was used to mark the 60 cases of cervical squamous metaplasia，70 cases of low-grade cervical intraepithelial neoplasia（LSIL） and 80 cases of high grade cervical intraepithelial lesions（HSIL） in EGFR，Ki67 and P16 expression.Result：The expression of EGFR，Ki67 and P16 in squamous metaplasia，LSIL and HSIL were compared，the differences were statistically significant（P<0.05），and the highest was HSIL，followed by the LSIL，and the lowest was metaplasia of squamous epithelium.EGFR，Ki67 and P16 in LSIL，compared the expression pattern of HSIL，the differences were statistically significant（P<0.05）.Correlation analysis showed that EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in LSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05），EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05）EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL and LSIL compared with each other，all had positive correlations（P<0.05）.Conclusion：The SP immunohistochemical method is used to mark the three proteins can be used as reference for SIL classification，at the same time，combined with the distribution of LSIL and HSIL，in order to reduce the false positive rate，improve the diagnostic accuracy of classification.
【Key words】 EGFR； Ki67； P16； Squamous intraepithelial lesions； Hierarchical diagnostic
First-author’s address：Chinese Medicine Hospital of Meizhou City，Meizhou 514017，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.21.003
隨着宫颈癌的相关研究不断深入，已被证实从人乳头状瘤病毒感染到高、低级别宫颈上皮内病变直至原发性宫颈癌发病为一个连续的发展过程[1-2]，其中高、低级别宫颈上皮内病以宫颈鳞状上皮内构形不正常及细胞异型增生为特征，是宫颈鳞状上皮的癌前病变[3-4]。同时，既往研究指出低级别宫颈上皮内病变（LSIL）可给予适当的治疗抑制其进展，且消退率较高，而高级别宫颈上皮内病变（HSIL）则较难通过治疗使其发生逆转，所以较大比率病例进展为宫颈癌，故准确的诊断分级对改善患者预后具有重要的意义[5-6]。本研究联合检测EGFR、Ki67和P16在宫颈鳞状上皮化生、LSIL及HSIL中的表达情况，旨在探讨EGFR、Ki67和P16在宫颈鳞状上皮内病变分级中的应用，现报道如下。 1 资料与方法
1.1 一般资料 所有组织标本均来自梅州市人民医院2014年1月-2015年12月首次宫颈活检手术的石蜡包埋组织，宫颈肿瘤组织学分类标准参照2014年宫颈上皮内病变WHO分级标准[7]，病理诊断由课题组成员分别阅片后共同确诊，排除放化疗史、免疫治疗史及子宫疾病史，其中60例宫颈鳞状上皮化生、70例LSIL及80例HSIL。60例宫颈鳞状上皮化生，年龄21～72岁，平均（41.26±7.16）岁；70例LSIL，年龄22～71岁，
平均（42.17±6.35）岁；80例HSIL，年龄24～67岁，平均（39.88±6.98）岁。三组标本的患者的年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法 本组标本用4%福尔马林固定，脱水，石蜡包埋，切片机切片4 μm，SP法免疫组化染色，EGFR标记采用鼠抗人EGFR单克隆抗体、P16标记采用鼠抗人P16单克隆抗体、Ki67标记采用鼠抗人Ki67单克隆抗体，试剂盒均来自福州迈新生物公司，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗为阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照。
1.3 结果判定标准 EGFR定位于细胞膜或细胞浆，P16定位在细胞核和/或胞浆，Ki67定位在细胞核，均以光镜下观察显示棕黄色纳入为阳性细胞，均以无阳性细胞或阳性细胞数<5%纳入为阴性，阳性细胞数≥5%纳入为阳性，同时将阳性组织分为3个等级：5%～25%纳入为（+），>25%～50%纳入为（++），>50%纳入为（+++）。
1.4 统计学处理 所有数据均经SPSS 20.0统计学软件进行统计学分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验或F检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验或Z检验，采用Pearson相关分析方法分析EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理类型宫颈组织之间表达的相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同病理类型宫颈组织中EGFR、Ki67和P16蛋白的表达 EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生中阳性率分别为16.66%、13.33%、15.00%，在LSIL中阳性率分别为30.00%、80.00%、77.14%，在HSIL中阳性率分别为76.25%、80.00%、98.75%。EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05），且均以HSIL为最高，LSIL次之，鳞状上皮化生为最低，见表1。
2.2 EGFR、Ki67和P16蛋白在LSIL、HSIL中的表达模式 EGFR、Ki67和P16在LSIL、HSIL中的表达模式比较，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。
2.3 EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理类型宫颈组织中蛋白表达的相关性 相关性分析显示，EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生与LSIL中蛋白表达两两比较，均无明显相关（r=0.11、0.08、0.09，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生与HSIL中蛋白表达两两比较，均无明显相关（r=0.10、0.08、0.08，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在LSIL与HSIL中蛋白表达两两比较，均呈正相关（r=0.35、0.48、0.47，P<0.05）。
3 讨论
人乳头状瘤病毒感染是宫颈癌发病的主要致病因素，这与感染后导致宿主癌基因被激活的一系列机制有关，诸如：人乳头状瘤病毒的E6、E7基因可整合于宿主的基因组内，分别引起P53、Rb蛋白的异常表达，进而引起Ki67、P16蛋白的异常表达；EGFR是原癌基因c-erb B-1的表达产物，是信号传导、细胞周期调控的关键分子[8-10]。既往研究显示，P16基因以缺失、突变方式广泛参与肿瘤形成，如直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，其失活可能导致细胞恶性增殖[11-12]。Ki67是一种核增殖抗体，表达于GO期以外处于其他细胞周期的细胞，可作为细胞增殖标记物用于肿瘤和反应性增生病变的鉴别[13-14]。EGFR与其受体结合可促进细胞的增殖分化并加速细胞的恶性转化，与肿瘤的组织学分型密切相关，已在为胃癌、乳腺癌的诊断中被应用[15-16]。故本研究选取EGFR、Ki67和P16蛋白作为宫颈鳞状上皮内病变的标记物。同时，选取EGFR、Ki67和P16蛋白作为宫颈鳞状上皮化生的标记物，宫颈鳞状上皮化生在组织学中于SIL相似、易混淆[17-21]，以作对照。
本研究结果表明，EGFR、Ki67和P16在鳞状上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05），且均以HSIL为最高，LSIL次之，鳞状上皮化生为最低，丛玲华等[20]、姚秀华等[21]的研究有过类似报道，本研究与其持有类似观点，其指出，三种蛋白在宫颈鳞状上皮化生等良性病变中几乎呈阴性，而在LSIL和HSIL中呈阳性，且随病情进展而阳性强度增高，提示三种蛋白在高表达与宫颈癌的发展密切关系。但这并不足以用于宫颈鳞状上皮内病变诊断分级。同時，本研究光镜下观察到宫颈鳞状上皮化生中EGFR、Ki67和P16较LSIL及HSIL阳性细胞数目少，LSIL中EGFR较Ki67和P16阳性细胞数目少，LSIL中EGFR、Ki67和P16较HSIL阳性细胞数目少，且主要分布于基底层，HSIL中EGFR、Ki67和P16较本组上述组织阳性细胞数目多，且阳性细胞主要分布于上皮下2/3层以上及呈弥漫性分布。由此，可见LSIL及HSIL中EGFR、Ki67和P16阳性数目随病情进展而增加，且阳性细胞分布也随之改变。本研究显示，EGFR、Ki67和P16在LSIL与HSIL中蛋白表达两两比较均呈正相关（P<0.05）。提示，宫颈癌的进展与多基因调控密切相关。故联合检测EGFR、Ki67和P16在LSIL和HSIL中的蛋白表达，同时结合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假阳性率，提高诊断分级的准确性。 综上所述，EGFR、Ki67和P16可能参与到了宫颈癌的发生、发展，应用免疫组化SP法标记三种蛋白可作为SIL分级的参考指标，同时结合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假阳性率，提高诊断分级的准确性。
参考文献
[1]程静，潘光鑫，周素，等.宫颈癌发病机制的探讨[J].中国妇幼保健，2014，29（28）：4545-4547.
[2]姜兰，李娟，王钰.保妇康栓治疗宫颈HPV感染的疗效观察[J].中国医学创新，2012，9（1）：43-44.
[3]常柏峰，赵琳琳，周彬，等.宫颈非典型腺细胞液基细胞学诊断的临床意义探讨[J].诊断病理学杂志，2016，23（2）：89-92.
[4]马亚琪，刘爱军.宫颈癌及癌前病变病理诊断及研究进展[J].实用妇产科杂志，2015，31（11）：803-805.
[5]陈观娣，钱德英，岑坚敏，等.宫颈高度鳞状上皮内病变治疗后高危型人乳头瘤病毒的消退规律[J].中国实用妇科与产科杂志，2011，27（1）：42-44.
[6]朱月琴，赵楠，夏岩，等.不同术式治疗宫颈鳞状上皮病变临床病理研究[J].中华肿瘤防治杂志，2017，24（1）：51-54.
[7]沈丹华.解读第4版WHO（2014）女性生殖系统肿瘤分类中宫颈癌前期病变的命名及分级变化[J].诊断病理学杂志，2015，22（3）：129-132.
[8]张蔚，刘珍，胡晓霞，等.宫颈癌中异常表达microRNA与HPV-16 E6/E7基因相关性分析[J].中华实用诊断与治疗杂志，2016，30（2）：120-123.
[9]殷复粉，王宁，于啸，等.宫颈癌细胞系中HPV16E6，E7及E6/E7基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响[J].中国癌症杂志，2015，25（9）：641-651.
[10] Feng W，Duan X，Liu J，et al.Morphoproteomic evidence of constitutively activated and overexpressed mTOR pathway in cervical squamous carcinoma and high grade squamous intraepithelial lesions[J].Int J Clin Exp Pathol，2009，2（3）：249-260.
[11]郑伟，武正炎.表皮生长因子受体、C-erbB-2原癌基因在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌骨髓微小转移的关系[J].南京医科大学学报（自然科学版），2000，20（1）：7-10.
[12]宋玉华，宋三泰，江泽飞，等.原癌基因Fra-1高表达与乳腺癌细胞转移表型的关系[J].西安交通大学学报：医学版，2008，29（2）：171-175.
[13] Ikenberg H，Bergeron C，Schmidt D，et al.Screening for cervical cancer precursors with p16/Ki-67 dual-stained cytology：results of the PALMS study[J].JNCI：Journal of the National Cancer Institute，2013，105（20）：1550-1557.
[14]遲秋君，梁冠盈，付瑶，等.子宫颈癌有无HPV感染和PCNA，Ki-67，p53表达与临床病理变化相关性分析[J].实用肿瘤学杂志，2014，28（2）：108-113.
[15]汤永峰，谢莉莉，冯晓敏，等.PTEN，p53和EGFR在乳腺癌中的表达与临床意义[J].现代肿瘤医学，2014，22（2）：345-349.
[16]董晨，李红.胃癌组织中Lrig1与EGFR基因表达[J].中国公共卫生，2015，31（6）：819-822.
[17]贠世娟，赵素香，徐辉.宫颈活检病理诊断与细胞学涂片结果不符的探讨[J].中国医学创新，2014，11（11）：139-141.
[18]丁伟山，宋贞荣.宫颈不成熟鳞状上皮化生52例分析[J].现代医药卫生，2012，28（2）：214-215.
[19]贾薇，潘晓琳，陆天才，等.子宫颈非典型不成熟鳞状上皮化生与子宫颈鳞状上皮内瘤变Ⅲ级形态学及增殖分化特征比较[J].临床与实验病理学杂志，2008，24（4）：423-428.
[20]丛玲华，戴珍珍，方来福，等.EGFR，P16，Ki67和P53在宫颈鳞状上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌中表达的临床意义[J].中国现代医生，2013，51（2）：87-90.
[21]姚秀华，黄卓敏，王耀楷，等.年轻妇女宫颈鳞状上皮内病变、宫颈癌组织中P16InK4a和Ki-67的表达及其预测作用[J].中国计划生育学杂志，2016，24（2）：111-113.
（收稿日期：2017-06-09） （本文编辑：张爽）