【摘 要】
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微生物凝乳酶具有生产周期短和易于发酵生产的优点，是传统小牛皱胃酶的经济高效替代选择之一。为了筛选新的凝乳酶产生菌，该研究以从传统发酵腐乳分离的霉菌为出发菌株，筛选具有高凝乳活性和低蛋白水解活性的霉菌菌株。采用ITS结合mt SSU rDNA扩增测序的方法对菌株进行了分子鉴定。通过硫酸铵分级盐析沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤层析
【基金项目】
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韩山师范学院科研项目（XN202030）； 潮州市科技专项计划项目（202102GY19）； 韩山师范学院科研项目（QD20191030）；
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微生物凝乳酶具有生产周期短和易于发酵生产的优点，是传统小牛皱胃酶的经济高效替代选择之一。为了筛选新的凝乳酶产生菌，该研究以从传统发酵腐乳分离的霉菌为出发菌株，筛选具有高凝乳活性和低蛋白水解活性的霉菌菌株。采用ITS结合mt SSU rDNA扩增测序的方法对菌株进行了分子鉴定。通过硫酸铵分级盐析沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤层析法对酶进行了纯化，并研究了凝乳酶酶学特性。筛选出菌株CQ3具有良好的凝乳活性和低蛋白水解活性，该菌株鉴定为变色栓菌（Trametes versicolor）。CQ3凝乳酶纯化后经SDS-PAGE分析呈现出分子质量为61 kDa的唯一条带。该酶作用的最适温度为45 ℃，最适pH为6.5，Ca2+对酶活有显著的促进作用。该酶在pH值为4.5～7.0和温度低于50 ℃条件下有良好的稳定性。蛋白酶抑制剂试验表明，该酶为一种天冬氨酸蛋白酶。该研究结果报道了一种新的产凝乳酶菌种资源，为丰富凝乳酶产生菌株资源，进一步评价栓菌凝乳酶在干酪加工适用性的研究提供了理论基础。
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