应用改良体细胞基因敲入技术内源标记跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1的研究

来源 :医学研究杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：hanjian8706

【摘要】

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目的应用改良的体细胞基因敲入技术将标签序列靶向敲人目的基因。方法设计引物并构建RHBDDI的打靶载体，经过腺相关病毒包装、感染、新霉素筛选和鉴定等步骤获得含有新霉素抗性

【作者】

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宋伟李尚泽张慧慧缪时英王琳芳张晓东杜润蕾

【机构】

：

北京中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室／北京协和医学院清华大学医学部基础学院,武汉大学生命科学学院

【出处】

：

医学研究杂志

【发表日期】

：

2011年11期

【关键词】

：

基因敲入 RHBDD1 同源重组 Knock - in RHBDD1 Hoialologous recombination

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目的应用改良的体细胞基因敲入技术将标签序列靶向敲人目的基因。方法设计引物并构建RHBDDI的打靶载体，经过腺相关病毒包装、感染、新霉素筛选和鉴定等步骤获得含有新霉素抗性的阳性单克隆细胞株，最后通过ere病毒感染和筛选获得RHBDDI内源敲人FLAG和SBP双标签的HCTI16结直肠癌细胞株。结果经过包装病毒感染与筛选验证后得到6个打靶阳性克隆；进一步经ere病毒感染与筛选后得到2株去除新霉素抗性标记的阳性细胞克隆；通过Western blotting实验证明RHBDDl-FLAG-SBP融合蛋白的表达。结

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