论文部分内容阅读
【摘 要】用直接化学发光免疫分析法，评估化学发光检测TSH的实验性能。结果显示该法精密度：批内与批间CV分别为1.97～2.56%与1.32～4.13%，回收率98.6%，灵敏度0.001 mIU/L，特异性未存在交叉反应性，因此，化学发光免疫分析法具高灵敏度和高特异性，使测得的TSH量不但能区分甲减，且用于诊断甲亢，甚至亚临床型或潜在型甲状腺功能亢进或减退。
【关键词】直接化学发光免疫分析；促甲状腺激素；甲亢；甲减
【文章编号】1004-7484（2014）05-3209-01
促甲状腺激素（TSH）为腺垂体合成和分泌的糖蛋白，分子量约30KD，整个分子由两条肽链—α链和β链组成。TSH全面促进甲状腺的机能，作为下丘脑-垂体-甲状腺调节系统的主要调节激素，血中甲状腺激素水平的变化，可负反馈地导致血清TSH水平出现指数方次级的显著改变。因此，在反应甲状腺功能紊乱上，血清TSH是比甲状腺激素更敏感的指标[1]。TSH不和血浆蛋白结合，其他干扰因素也比甲状腺激素测定少，更可靠。由于上述原因，现在国内外均推荐以血清TSH测定作为甲状腺功能紊乱的首选筛查项目[2]。
1 资料与方法
1.1仪器和试剂 使用西门子化学发光免疫分析仪ADVIA Centaur XP和西门子进口配套试剂
1.2标本 选取2011年1月至2013年12月在梧州市红十字会医院住院的疑似有甲状腺疾患者血清为受检标本，实验评价血清为新鲜混合血清或定标血清。
1.3 检测方法 空腹抽取新鲜血3mL，离心分离血清，24小时内检测完成。严格按照仪器的SOP文件操作。
2 结果
2.1 稀释回收率 以倍比稀释关系进行稀释，采用通用稀释剂1对促甲状腺素浓度在0.288至144.24mlU/L范围内的6例患者样本进行稀释，并进行分析平均回收率范围在93.1%-104.8%，均值为98.6%。在进行稀释回收试验时发现，标本浓度为低值时，其稀释回收率均值也比其它含量回收率均值低。
2.2 特异性 向含有促甲状腺素的样本中加入人绒毛膜促性腺激素、促卵泡激素和促黄体激素，以确定ADVIA Centaur XP TSH检测与上述激素的交叉反应性。当人绒毛膜促性腺激素、促卵泡激素和促黄体激素的浓度分别为200000lU/L、1500lU/L和600lU/L时，未观察到它们与ADVIA Centaur XP TSH3-Ul检测之间存在交叉反应性。
2.3线性 将取一高浓度血清稀释成浓度梯度。线性范围与相关性试验表明线性范围为0.001～150 mIU/L，回归方程：Y=0.9433X+0.2075，r=0.9942。表明该检测法在其检测范围内具有良好的线性特征。
2.4精密度 根据CLSI文件EP5-A2中所述操作，进行精密度评估。根据该文件，在20个不同的工作日内， ADVIA Centaur XP检测系统中，采用2个批次的试剂和2个批次的校准品，对2份质控品和2份患者血清样本进行2轮（每轮检测重复2次）检测分析（每例样本检测40次以上）。批内精密度CV值分别为1.97%，2.26%，2.56%，2.27%。每天一次共20天，批间精密度CV值为4.13%，3.99%，1.32%，1.87%。
2.5灵敏度 采用ADVIA Centaur XP检测法对促甲状腺素浓度进行最低检出量检 测，测定下限空白浓度为0.001μlU/m（mlU/L）。空白下限浓度被定义为：促甲状腺素零标准品检测结果第95百分位数所对应的促甲状腺素浓度。其检测过程为：S1=0.1 mIU/L稀释成0.001，0.002，0.004 mIU/L，每天测定一次，共20天，测得批间CV值分别为17.62%，16.32%，12.01%，均小于20%。
3 讨论
化学发光免疫分析有灵敏度高，特异性强，无放射性危害性等技术优点，实现了检测的自动化，避免了手工操作的误差，因此已基本取代了放射免疫、酶免疫分析等技术，被广泛应用于临床实验诊断和医学研究工作中[3]。虽血液中TSH仅微量存在，但直接化学发光免疫分析法的试剂测定TSH灵敏度已高达0.001 mIU/L，已完全可以满足临床检测需要。该指标可用于传统的甲减诊断和诊断甲亢，同时能辅助诊断自身免疫性甲状腺疾病，TSH还是甲亢病人药物治疗的良好跟踪指标。临床应用表明CLIA诊断甲亢的阳性率指标从高到低依次为TSH、FT3、FT4、TT3、TT4。诊断甲减的阳性率指标依次为FT4、TSH、TT4、FT3、TT3。TT4、TT3的测定结果易受蛋白含量的影响，FT3、FT4测定需加蛋白分离剂，分离的纯度直接影响到极微量FT3、FT4的测定结果，而用直接化学發光免疫分析法对TSH的测定，运用单克隆抗体，增加了反应的特异性，吖啶酯发光的氧化反应简单快速，不需要催化剂，保证了测定的敏感性。
总之，用直接化学发光免疫分析法测定TSH，不但对甲减，甲亢有明确诊断作用，而且对亚临床型甲亢，甲减有提示作用，对药物治疗有指导作用，对垂体性疾病或甲状腺抵抗综合症具有协助诊断作用，因而具有极高的临床应用价值。
参考文献：
[1] 马冬红，陆汉魁，高云朝等，六种TSH检测方法的对比研究. 标记免疫分析与临床， 2010，17（4）：102-105
[2] 周新，涂植光. 甲状腺功能紊乱. 临床生物化学和生物化学检验第三版， 2003：384
[3] 王兰兰，许化溪. 临床免疫学与免疫检验.临床免疫学检验第五版， 2011：97
【关键词】直接化学发光免疫分析；促甲状腺激素；甲亢；甲减
【文章编号】1004-7484（2014）05-3209-01
促甲状腺激素（TSH）为腺垂体合成和分泌的糖蛋白，分子量约30KD，整个分子由两条肽链—α链和β链组成。TSH全面促进甲状腺的机能，作为下丘脑-垂体-甲状腺调节系统的主要调节激素，血中甲状腺激素水平的变化，可负反馈地导致血清TSH水平出现指数方次级的显著改变。因此，在反应甲状腺功能紊乱上，血清TSH是比甲状腺激素更敏感的指标[1]。TSH不和血浆蛋白结合，其他干扰因素也比甲状腺激素测定少，更可靠。由于上述原因，现在国内外均推荐以血清TSH测定作为甲状腺功能紊乱的首选筛查项目[2]。
1 资料与方法
1.1仪器和试剂 使用西门子化学发光免疫分析仪ADVIA Centaur XP和西门子进口配套试剂
1.2标本 选取2011年1月至2013年12月在梧州市红十字会医院住院的疑似有甲状腺疾患者血清为受检标本，实验评价血清为新鲜混合血清或定标血清。
1.3 检测方法 空腹抽取新鲜血3mL，离心分离血清，24小时内检测完成。严格按照仪器的SOP文件操作。
2 结果
2.1 稀释回收率 以倍比稀释关系进行稀释，采用通用稀释剂1对促甲状腺素浓度在0.288至144.24mlU/L范围内的6例患者样本进行稀释，并进行分析平均回收率范围在93.1%-104.8%，均值为98.6%。在进行稀释回收试验时发现，标本浓度为低值时，其稀释回收率均值也比其它含量回收率均值低。
2.2 特异性 向含有促甲状腺素的样本中加入人绒毛膜促性腺激素、促卵泡激素和促黄体激素，以确定ADVIA Centaur XP TSH检测与上述激素的交叉反应性。当人绒毛膜促性腺激素、促卵泡激素和促黄体激素的浓度分别为200000lU/L、1500lU/L和600lU/L时，未观察到它们与ADVIA Centaur XP TSH3-Ul检测之间存在交叉反应性。
2.3线性 将取一高浓度血清稀释成浓度梯度。线性范围与相关性试验表明线性范围为0.001～150 mIU/L，回归方程：Y=0.9433X+0.2075，r=0.9942。表明该检测法在其检测范围内具有良好的线性特征。
2.4精密度 根据CLSI文件EP5-A2中所述操作，进行精密度评估。根据该文件，在20个不同的工作日内， ADVIA Centaur XP检测系统中，采用2个批次的试剂和2个批次的校准品，对2份质控品和2份患者血清样本进行2轮（每轮检测重复2次）检测分析（每例样本检测40次以上）。批内精密度CV值分别为1.97%，2.26%，2.56%，2.27%。每天一次共20天，批间精密度CV值为4.13%，3.99%，1.32%，1.87%。
2.5灵敏度 采用ADVIA Centaur XP检测法对促甲状腺素浓度进行最低检出量检 测，测定下限空白浓度为0.001μlU/m（mlU/L）。空白下限浓度被定义为：促甲状腺素零标准品检测结果第95百分位数所对应的促甲状腺素浓度。其检测过程为：S1=0.1 mIU/L稀释成0.001，0.002，0.004 mIU/L，每天测定一次，共20天，测得批间CV值分别为17.62%，16.32%，12.01%，均小于20%。
3 讨论
化学发光免疫分析有灵敏度高，特异性强，无放射性危害性等技术优点，实现了检测的自动化，避免了手工操作的误差，因此已基本取代了放射免疫、酶免疫分析等技术，被广泛应用于临床实验诊断和医学研究工作中[3]。虽血液中TSH仅微量存在，但直接化学发光免疫分析法的试剂测定TSH灵敏度已高达0.001 mIU/L，已完全可以满足临床检测需要。该指标可用于传统的甲减诊断和诊断甲亢，同时能辅助诊断自身免疫性甲状腺疾病，TSH还是甲亢病人药物治疗的良好跟踪指标。临床应用表明CLIA诊断甲亢的阳性率指标从高到低依次为TSH、FT3、FT4、TT3、TT4。诊断甲减的阳性率指标依次为FT4、TSH、TT4、FT3、TT3。TT4、TT3的测定结果易受蛋白含量的影响，FT3、FT4测定需加蛋白分离剂，分离的纯度直接影响到极微量FT3、FT4的测定结果，而用直接化学發光免疫分析法对TSH的测定，运用单克隆抗体，增加了反应的特异性，吖啶酯发光的氧化反应简单快速，不需要催化剂，保证了测定的敏感性。
总之，用直接化学发光免疫分析法测定TSH，不但对甲减，甲亢有明确诊断作用，而且对亚临床型甲亢，甲减有提示作用，对药物治疗有指导作用，对垂体性疾病或甲状腺抵抗综合症具有协助诊断作用，因而具有极高的临床应用价值。
参考文献：
[1] 马冬红，陆汉魁，高云朝等，六种TSH检测方法的对比研究. 标记免疫分析与临床， 2010，17（4）：102-105
[2] 周新，涂植光. 甲状腺功能紊乱. 临床生物化学和生物化学检验第三版， 2003：384
[3] 王兰兰，许化溪. 临床免疫学与免疫检验.临床免疫学检验第五版， 2011：97