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【摘 要】 目的：建立用HPLC法测定奥拉西坦原料的含量方法。方法：色谱柱为Inertsil ODS-SP（4.6×250mm，5μm），流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至3.0）为流动相；检测波长为220nm，流速为1.0ml/min，进样量为20μl，柱温为30℃。结果：该方法精密度和理论塔板数均较好。奥拉西坦检测浓度在57.5μg/ml～460μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，A=7008.4x +2150.9，r=1（n=5）。定量限为0.87ng，方法回收率为99.85%。结论：方法准确、简便，重现性好，可用于奥拉西坦原料的质量控制。
【关键词】 HPLC 奥拉西坦 含量
奥拉西坦（oxiracetam）为吡拉西坦的类似物，属于吡咯烷酮类的益智药（其结构式见图1），在1974年由意大利ISF公司首次合成，并于1987年在意大利首次上市，用于治疗脑损伤引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍等。国内于1997年2月批准石家庄制药集团欧意药业的胶囊剂上市（商品名欧来宁），随后该公司又开发出其注射剂。由于其不良反应少、耐受性好，因此在临床上的应用非常广泛[1]-[3]。本文采用HPLC法测定奥拉西坦原料的含量，并对方法进行验证，为控制该产品的质量提供依据。
Fig1 The structural formula of oxiracetam
1 仪器与试药
美国SSI型高效液相色谱仪；奥拉西坦对照品（中国食品药品检定研究院，批号：101032-200901，纯度：99.6%），奥拉西坦原料药（四川唯拓生物医药有限公司制，批号121201，130101，130201）；磷酸二氢钾为分析纯。
2 色谱条件
以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）为流动相，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min。
3 方法学考察
3.1 专属性试验
3.1.1 对照品溶液的制备 精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含约0.2mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。
3.1.2 供试品溶液的制备 精密称取奥拉西坦供试品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含约0.2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。
分别取20μL空白流动相、对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。
图2 专属性试验
（a）空白流动相；（b）奥拉西坦对照品溶液；（c）奥拉西坦供试品溶液
Fig2 specificity experiment
（a）mobile phase；（b）oxiracetam contrast solution；（c）oxiracetam test solution
3.2 定量限
取奥拉西坦对照品溶液逐级稀释，测定奥拉西坦的峰高，同时测定相同条件下的色谱基线噪声，取基线噪声的10倍值作为奥拉西坦测定的最低检出量，测得最小检测浓度为0.87ng。
3.3 线性关系
取奥拉西坦对照品11.50mg，置于25ml量瓶中，加流动相溶解至刻度。取该溶液稀释制成一系列浓度对照品溶液，精密量取20μl进样测定。以浓度（c，μg/ml）为横坐标，以峰面积（A）为纵坐标，用最小二乘法计算回归方程及相关系数，得线性方程：A=7008.4x+2150.9（r=1，n=5）。结果表明，奥拉西坦检测浓度线性范围为57.5μg/ml～460μg/ml。
3.4 精密度试验
取奥拉西坦对照品溶液连续进样6针，测得峰面积的RSD（%）为0.44%，因此该方法的精密度较好。
3.5 回收率试验
取奥拉西坦原料样品9份，分别为样品称样量的80%、100%和120%，各三份，加流动相制备成供试品溶液，分别进样20μl，按外标法分别测定含量并计算回收率。结果平均回收率为99.85%，因此该方法的准确性较好。
3.6 重复性试验
取奥拉西坦原料样品，制备6份供试品溶液，分别进样测定，结果6份样品测得结果的RSD%为0.67%。因此该方法的重复性良好。
3.7 耐用性试验
取奥拉西坦样品与对照品，分别加流动相制成每1ml中含奥拉西坦0.2mg的溶液，作为供试品与对照品溶液，使用不同品牌色谱柱和不同仪器，进行耐用性试验。结果使用不同品牌和规格的色谱柱及不同仪器进行分析，本品中奥拉西坦含量测定结果基本一致，说明该含量测定方法具有较好的耐用性。
3.8 样品溶液稳定性试验
取奥拉西坦样品溶液于室温下放置，在不同时间（0、2、4、6、8h）分别进样测定，结果峰面积的RSD（%）为0.45%，因此本品的样品溶液在室温下至少8h内稳定。
3.9 样品中含量测定结果
用所验证的奥拉西坦含量检测方法，对本公司三批样品进行含量检查，结果121201批为99.97%，121202批为100.03%，121203批为99.86%。
4 结论
本文使用的HPLC系统进行含量的测定，奥拉西坦出峰时间适中，空白流动相无干扰，专属性较强；奥拉西坦峰理论塔板数高，准确度好，且经方法学验证确定了该方法的可行性。因此本实验所建立的方法能满足奥拉西坦原料的含量的测定。
参考文献
[1]朱继，奥拉西坦治疗轻中型脑伤的临床研究[J]. 第三军医大学学报，2006，28（10）：1124-1125
[2]姚革，程洁等，奥拉西坦治疗阿尔茨海默病的临床研究[J]. 老年医学与保健，2007，13（5）：307-309
[3]但炜，孙晓川等，奥拉西坦对急性轻型脑伤患者功能的影响[J].创伤外科杂志，2006，8（3）：260-262
作者简历：高青青 性别：女 民族：汉 籍贯：四川成都 出生年：1987 学历：本科 职称：无 研究方向：药物分析
【关键词】 HPLC 奥拉西坦 含量
奥拉西坦（oxiracetam）为吡拉西坦的类似物，属于吡咯烷酮类的益智药（其结构式见图1），在1974年由意大利ISF公司首次合成，并于1987年在意大利首次上市，用于治疗脑损伤引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍等。国内于1997年2月批准石家庄制药集团欧意药业的胶囊剂上市（商品名欧来宁），随后该公司又开发出其注射剂。由于其不良反应少、耐受性好，因此在临床上的应用非常广泛[1]-[3]。本文采用HPLC法测定奥拉西坦原料的含量，并对方法进行验证，为控制该产品的质量提供依据。
Fig1 The structural formula of oxiracetam
1 仪器与试药
美国SSI型高效液相色谱仪；奥拉西坦对照品（中国食品药品检定研究院，批号：101032-200901，纯度：99.6%），奥拉西坦原料药（四川唯拓生物医药有限公司制，批号121201，130101，130201）；磷酸二氢钾为分析纯。
2 色谱条件
以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）为流动相，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min。
3 方法学考察
3.1 专属性试验
3.1.1 对照品溶液的制备 精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含约0.2mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。
3.1.2 供试品溶液的制备 精密称取奥拉西坦供试品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含约0.2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。
分别取20μL空白流动相、对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。
图2 专属性试验
（a）空白流动相；（b）奥拉西坦对照品溶液；（c）奥拉西坦供试品溶液
Fig2 specificity experiment
（a）mobile phase；（b）oxiracetam contrast solution；（c）oxiracetam test solution
3.2 定量限
取奥拉西坦对照品溶液逐级稀释，测定奥拉西坦的峰高，同时测定相同条件下的色谱基线噪声，取基线噪声的10倍值作为奥拉西坦测定的最低检出量，测得最小检测浓度为0.87ng。
3.3 线性关系
取奥拉西坦对照品11.50mg，置于25ml量瓶中，加流动相溶解至刻度。取该溶液稀释制成一系列浓度对照品溶液，精密量取20μl进样测定。以浓度（c，μg/ml）为横坐标，以峰面积（A）为纵坐标，用最小二乘法计算回归方程及相关系数，得线性方程：A=7008.4x+2150.9（r=1，n=5）。结果表明，奥拉西坦检测浓度线性范围为57.5μg/ml～460μg/ml。
3.4 精密度试验
取奥拉西坦对照品溶液连续进样6针，测得峰面积的RSD（%）为0.44%，因此该方法的精密度较好。
3.5 回收率试验
取奥拉西坦原料样品9份，分别为样品称样量的80%、100%和120%，各三份，加流动相制备成供试品溶液，分别进样20μl，按外标法分别测定含量并计算回收率。结果平均回收率为99.85%，因此该方法的准确性较好。
3.6 重复性试验
取奥拉西坦原料样品，制备6份供试品溶液，分别进样测定，结果6份样品测得结果的RSD%为0.67%。因此该方法的重复性良好。
3.7 耐用性试验
取奥拉西坦样品与对照品，分别加流动相制成每1ml中含奥拉西坦0.2mg的溶液，作为供试品与对照品溶液，使用不同品牌色谱柱和不同仪器，进行耐用性试验。结果使用不同品牌和规格的色谱柱及不同仪器进行分析，本品中奥拉西坦含量测定结果基本一致，说明该含量测定方法具有较好的耐用性。
3.8 样品溶液稳定性试验
取奥拉西坦样品溶液于室温下放置，在不同时间（0、2、4、6、8h）分别进样测定，结果峰面积的RSD（%）为0.45%，因此本品的样品溶液在室温下至少8h内稳定。
3.9 样品中含量测定结果
用所验证的奥拉西坦含量检测方法，对本公司三批样品进行含量检查，结果121201批为99.97%，121202批为100.03%，121203批为99.86%。
4 结论
本文使用的HPLC系统进行含量的测定，奥拉西坦出峰时间适中，空白流动相无干扰，专属性较强；奥拉西坦峰理论塔板数高，准确度好，且经方法学验证确定了该方法的可行性。因此本实验所建立的方法能满足奥拉西坦原料的含量的测定。
参考文献
[1]朱继，奥拉西坦治疗轻中型脑伤的临床研究[J]. 第三军医大学学报，2006，28（10）：1124-1125
[2]姚革，程洁等，奥拉西坦治疗阿尔茨海默病的临床研究[J]. 老年医学与保健，2007，13（5）：307-309
[3]但炜，孙晓川等，奥拉西坦对急性轻型脑伤患者功能的影响[J].创伤外科杂志，2006，8（3）：260-262
作者简历：高青青 性别：女 民族：汉 籍贯：四川成都 出生年：1987 学历：本科 职称：无 研究方向：药物分析