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摘要：
目的： 建立一种高效液相色谱法测定安康欣胶囊中苦参碱的含量。方法： 以ODS-C18为固定相，乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75）（用磷酸调节pH值至7.0）为流动相，检测波长为210nm。结果： 苦参碱线性范围为5.0μg/ml～150μg/ml，r=0.9998，加样回收率为98.56%，RSD为0.63%。结论： 该方法简便、可靠、准确，可用于安康欣胶囊的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；安康欣胶囊；苦参碱
Determination of matrine in Ankangxin Capsules by HPLC
Ten Hong， ZHOU Wen-yan Hu Jing-chu （Anhui Gaoshan Pharmaceutical Co.，Ltd，Jixi 245300，China）
Abstract：
Aim To establish a HPLC method for determination the contect of matrine in Ankangxin Capsules. Methods In this study， ODS-C18 was adopted as stationary phase with the mobile phase of Acetonitrile- methanol -0.15% Triethylamine （12.5：12.5：75），and Adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid，the detection wavelength was at 210nm. Result The linear in sample size range of matrine was 5.0μg～150μg，r=0.9998.The average recovery was 98.56%，RSD=0.63%. Conclusion This method is simple，reliable，accurate and can be used as a quality control of Ankangxin Capsules.
Key words：HPLC；Ankangxin Capsules； Matrine
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0079-02
安康欣胶囊由半枝莲、山豆根、夏枯草、蒲公英、鱼腥草、石上柏等18味中药组成，具有活血化瘀，软坚散结，清热解毒，扶正固本的功效，用于肺癌，胃癌，肝癌等肿瘤的辅助治疗。本品为我公司独家产品，疗效确切，市场运行良好。本品原国家标准中对样品中的山豆根进行了含量测定，控制指标为苦参碱，采用的是薄层扫描法，且展开剂含有苯。通过比较发现，高效液相色谱法在准确度、精密度和含量重现性等方面均优于薄层扫描法，且高效液相色谱法为样品含量测定的常用方法。故本品标准改用高效液相色谱法测定苦参碱的含量，并进行相应方法学的研究，结果满意。
1 仪器与试药
1.1 LC-10ATvP高效液相色谱仪（日本岛津公司）；756PC型紫外分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；AL104型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；JL-60型超声波清洗器（上海杰理科技有限公司）；HH-S2型数显恒温水浴锅（金坛市金城国胜试验仪器厂）。
1.2 乙腈、甲醇（色谱纯，上海试一化学试剂有限公司）；磷酸（分析纯，中国医药（集团）上海化学试剂公司）；重蒸水；苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，产品批号：110703-200322）；安康欣胶囊（本公司生产，批号：120108、120201、120330）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：
色谱柱：C18，150×4.6mm（5μm）；流动相：乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75），用磷酸调节pH值至7.0；检测波长：210nm；柱温：30℃；进样量：20μl；流速：1.0ml/min。理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备： 取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备： 取本品内容物，混匀，取约1.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入0.1%盐酸25ml，超声处理（功率250W，频率33kHz）15分钟，滤过，取续滤液10ml，置分液漏斗中，加氨试液1ml，摇匀，用三氯甲烷提取三次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇分次溶解，定量转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备： 按处方比例称取不含山豆根的阴性对照样品适量，按“供试品溶液的制备”项下方法操作，制备成阴性对照溶液。
2.4 方法可行性考察： 中药生物碱类成份的测定，多采用乙腈-三乙胺或甲醇-三乙胺系统作为流动相，通过对流动相的比例及组成成份的调整，确定乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75）（用磷酸调节pH值至7.0）为最佳流动相。
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μl，在上述色谱条件下进行测定，结果见图2。结果显示，样品色谱图中与对照品色谱峰保留时间10.7min处有相应的苦参碱色谱峰，理论塔板数为5706.7，与左右相邻杂质峰分离度分别为8.141和1.786，均能达到基线分离，满足样品中含量测定的要求。而阴性样品在相应位置处没有吸收峰，说明阴性样品不干扰样品中苦参碱的测定。
2.7 供试品溶液的制备方法考察
2.7.1 提取溶剂的选择：
苦参碱属吡啶生物碱类化合物，在乙醇、三氯甲烷、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮、0.1%盐酸溶液中易溶，在水中溶解，在石油醚中略溶。结合本制剂处方组成特点，本试验分别考察了以下三种提取方式对本品中苦参碱的提取效果。三种方式分别为0.1%盐酸溶液提取，三氯甲烷萃取；用水提取，三氯甲烷萃取和采用三氯甲烷直接提取。
结果表明，以水为提取溶剂，苦参碱提取率较低，提取不完全；三氯甲烷与0.1%盐酸溶液提取比较完全，以0.1%盐酸溶液为提取溶剂提取率最高，且苦参碱峰形较好，杂质峰少，不干扰样品的含量测定。故本品供试品溶液的制备选择0.1%盐酸溶液为提取溶剂，用三氯甲烷萃取的提取方法。
2.8 溶液稳定性试验：
新制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8小时，各取20μl进样分析，记录色谱峰面积。结果测得峰面积的RSD为0.73%，表明供试品溶液在8小时内是稳定的。
2.9 加样回收率试验：
取已知含量的样品（产品批号为120108，含苦参碱2.216mg/粒，平均每粒装量0.5029g），混匀，分别精密称取细粉约0.79g，共9份，并分别精密加入对照品储备液（3.38mg/ml）0.8ml、0.8ml、0.8ml、1.0ml、1.0ml、1.0ml、1.2ml、1.2ml、1.2ml，照样品含量测定方法测定含量，分别进行测定，计算回收率。结果见表1。
3 讨论
本品处方中山豆根有小毒，且山豆根为主要成分，故应对山豆根进行含量测定，以苦参碱为控制指标。
参考文献
[1]中华人民共和国国家药典委员会编.中国药典[S]2010年版一部.北京：化学工业出版社，2010.
[2]马开宇，刘丛彬.RP-HPLC法测定妇炎康片中苦参碱的含量[J].安徽医药，2005，9（9）：669-670.
[3]戴五好，钱利武，杨士友等.苦参、山豆根植物中主要生物碱药学研究进展[J].安徽医药，2011，15（9）：1057-1060.
目的： 建立一种高效液相色谱法测定安康欣胶囊中苦参碱的含量。方法： 以ODS-C18为固定相，乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75）（用磷酸调节pH值至7.0）为流动相，检测波长为210nm。结果： 苦参碱线性范围为5.0μg/ml～150μg/ml，r=0.9998，加样回收率为98.56%，RSD为0.63%。结论： 该方法简便、可靠、准确，可用于安康欣胶囊的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；安康欣胶囊；苦参碱
Determination of matrine in Ankangxin Capsules by HPLC
Ten Hong， ZHOU Wen-yan Hu Jing-chu （Anhui Gaoshan Pharmaceutical Co.，Ltd，Jixi 245300，China）
Abstract：
Aim To establish a HPLC method for determination the contect of matrine in Ankangxin Capsules. Methods In this study， ODS-C18 was adopted as stationary phase with the mobile phase of Acetonitrile- methanol -0.15% Triethylamine （12.5：12.5：75），and Adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid，the detection wavelength was at 210nm. Result The linear in sample size range of matrine was 5.0μg～150μg，r=0.9998.The average recovery was 98.56%，RSD=0.63%. Conclusion This method is simple，reliable，accurate and can be used as a quality control of Ankangxin Capsules.
Key words：HPLC；Ankangxin Capsules； Matrine
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0079-02
安康欣胶囊由半枝莲、山豆根、夏枯草、蒲公英、鱼腥草、石上柏等18味中药组成，具有活血化瘀，软坚散结，清热解毒，扶正固本的功效，用于肺癌，胃癌，肝癌等肿瘤的辅助治疗。本品为我公司独家产品，疗效确切，市场运行良好。本品原国家标准中对样品中的山豆根进行了含量测定，控制指标为苦参碱，采用的是薄层扫描法，且展开剂含有苯。通过比较发现，高效液相色谱法在准确度、精密度和含量重现性等方面均优于薄层扫描法，且高效液相色谱法为样品含量测定的常用方法。故本品标准改用高效液相色谱法测定苦参碱的含量，并进行相应方法学的研究，结果满意。
1 仪器与试药
1.1 LC-10ATvP高效液相色谱仪（日本岛津公司）；756PC型紫外分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；AL104型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；JL-60型超声波清洗器（上海杰理科技有限公司）；HH-S2型数显恒温水浴锅（金坛市金城国胜试验仪器厂）。
1.2 乙腈、甲醇（色谱纯，上海试一化学试剂有限公司）；磷酸（分析纯，中国医药（集团）上海化学试剂公司）；重蒸水；苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，产品批号：110703-200322）；安康欣胶囊（本公司生产，批号：120108、120201、120330）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：
色谱柱：C18，150×4.6mm（5μm）；流动相：乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75），用磷酸调节pH值至7.0；检测波长：210nm；柱温：30℃；进样量：20μl；流速：1.0ml/min。理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备： 取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备： 取本品内容物，混匀，取约1.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入0.1%盐酸25ml，超声处理（功率250W，频率33kHz）15分钟，滤过，取续滤液10ml，置分液漏斗中，加氨试液1ml，摇匀，用三氯甲烷提取三次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇分次溶解，定量转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备： 按处方比例称取不含山豆根的阴性对照样品适量，按“供试品溶液的制备”项下方法操作，制备成阴性对照溶液。
2.4 方法可行性考察： 中药生物碱类成份的测定，多采用乙腈-三乙胺或甲醇-三乙胺系统作为流动相，通过对流动相的比例及组成成份的调整，确定乙腈-甲醇-0.15%三乙胺（12.5：12.5：75）（用磷酸调节pH值至7.0）为最佳流动相。
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μl，在上述色谱条件下进行测定，结果见图2。结果显示，样品色谱图中与对照品色谱峰保留时间10.7min处有相应的苦参碱色谱峰，理论塔板数为5706.7，与左右相邻杂质峰分离度分别为8.141和1.786，均能达到基线分离，满足样品中含量测定的要求。而阴性样品在相应位置处没有吸收峰，说明阴性样品不干扰样品中苦参碱的测定。
2.7 供试品溶液的制备方法考察
2.7.1 提取溶剂的选择：
苦参碱属吡啶生物碱类化合物，在乙醇、三氯甲烷、甲苯、苯中极易溶解，在丙酮、0.1%盐酸溶液中易溶，在水中溶解，在石油醚中略溶。结合本制剂处方组成特点，本试验分别考察了以下三种提取方式对本品中苦参碱的提取效果。三种方式分别为0.1%盐酸溶液提取，三氯甲烷萃取；用水提取，三氯甲烷萃取和采用三氯甲烷直接提取。
结果表明，以水为提取溶剂，苦参碱提取率较低，提取不完全；三氯甲烷与0.1%盐酸溶液提取比较完全，以0.1%盐酸溶液为提取溶剂提取率最高，且苦参碱峰形较好，杂质峰少，不干扰样品的含量测定。故本品供试品溶液的制备选择0.1%盐酸溶液为提取溶剂，用三氯甲烷萃取的提取方法。
2.8 溶液稳定性试验：
新制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8小时，各取20μl进样分析，记录色谱峰面积。结果测得峰面积的RSD为0.73%，表明供试品溶液在8小时内是稳定的。
2.9 加样回收率试验：
取已知含量的样品（产品批号为120108，含苦参碱2.216mg/粒，平均每粒装量0.5029g），混匀，分别精密称取细粉约0.79g，共9份，并分别精密加入对照品储备液（3.38mg/ml）0.8ml、0.8ml、0.8ml、1.0ml、1.0ml、1.0ml、1.2ml、1.2ml、1.2ml，照样品含量测定方法测定含量，分别进行测定，计算回收率。结果见表1。
3 讨论
本品处方中山豆根有小毒，且山豆根为主要成分，故应对山豆根进行含量测定，以苦参碱为控制指标。
参考文献
[1]中华人民共和国国家药典委员会编.中国药典[S]2010年版一部.北京：化学工业出版社，2010.
[2]马开宇，刘丛彬.RP-HPLC法测定妇炎康片中苦参碱的含量[J].安徽医药，2005，9（9）：669-670.
[3]戴五好，钱利武，杨士友等.苦参、山豆根植物中主要生物碱药学研究进展[J].安徽医药，2011，15（9）：1057-1060.