【摘 要】
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目的研究尿石素A(Uro-A)对人肝癌细胞Huh-7脂代谢的影响并探讨其作用机制。方法以CCK-8法检测不同浓度尿石素A作用24、48 h对Huh-7细胞的细胞毒性;运用油酸(oleic acid,OA)诱导建
【机 构】
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湖北中医药大学药学院; 湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81603338)
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目的研究尿石素A(Uro-A)对人肝癌细胞Huh-7脂代谢的影响并探讨其作用机制。方法以CCK-8法检测不同浓度尿石素A作用24、48 h对Huh-7细胞的细胞毒性;运用油酸(oleic acid,OA)诱导建立Huh-7细胞脂肪变性模型,油红O染色法观察Uro-A对Huh-7细胞脂质累积的改善作用,测定甘油三酯(TG)含量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胆固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FASN)、过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达水平;Western Blot法检测丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-AKTThr308)、SREBP-1c、FASN蛋白表达水平;运用AKT过表达载体转染Huh-7细胞,确证Uro-A对p-AKTThr308、SREBP-1c、FASN等脂代谢相关基因表达的影响。结果 OA诱导后Huh-7细胞内脂质大量累积,TG含量升高(P <0.01),FASN、SREBP-1c、PPARγ mRNA的表达水平升高(P <0.01),PPARα mRNA的表达水平降低(P <0.01),p-AKTThr308、SREBP-1c、FASN蛋白表达升高(P <0.01);过表达AKT诱导SREBP-1c、FASN等蛋白表达水平升高(P <0.01)。Uro-A(10、20μmol·L-1)作用后,细胞内脂质累积减少,TG含量降低,FASN、SREBP-1c、PPARγ mRNA的表达水平降低(P <0.05,P <0.01),PPARα mRNA的表达水平升高(P <0.05,P <0.01),p-AKTThr308、SREBP-1c、FASN等脂代谢相关基因蛋白表达下调(P <0.05,P <0.01)。结论尿石素A对Huh-7细胞脂代谢具有调节作用,其作用机制可能是通过调控AKT/SREBP-1c/FASN信号通路调节肝细胞脂肪酸合成。
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