【摘 要】
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目的 研究供体抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞对受体B细胞反应的影响.方法 用尼龙毛柱法分离B细胞,用MACS磁珠分选法从Lewis大鼠脾脏淋巴细胞中分离CD4+CD25+Treg细胞,然后
【机 构】
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第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037第三军医大学临床检验学教研室,重庆,400038;
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目的 研究供体抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞对受体B细胞反应的影响.方法 用尼龙毛柱法分离B细胞,用MACS磁珠分选法从Lewis大鼠脾脏淋巴细胞中分离CD4+CD25+Treg细胞,然后将分离纯化的Lewis大鼠Treg细胞负载F344大鼠抗原,以RT-PCR检测分选细胞中Foxp3基因表达水平.然后以MTT法证实获得对供体抗原的特异性.将受体Treg细胞与B淋巴细胞组成共培养反应体系,然后向共培养体系中加或不加入Anti-TGF-β1、Anti-CTLA4的阻断方法,培养5天后用ELISA发检测不同组上清中的IgA和IgG分泌水平.结果 负载供体抗原后,CD4+CD25+调节性T细胞对供体抗原的抑制率(IR)为80.5%.Treg与B细胞共培养组与阳性对照组相比较,上清中的IgG和IgA水平明显降低(P＜0.01),分别达到了(2.4±0.7)μg/ml和(6.0±1.0)μg/ml.在体系中加入Anti-TGF-β1后上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.3±0.5)μg/ml和(7.1±0.9)μg/ml;加入Anti-CTLA4后上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.4±0.5)μg/ml和(7.3±0.9)μg/ml;两种阻断剂同时加入后上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.7±0.6)μg/ml和(7.5±0.7)μg/ml,三组分泌水平都较共培养组明显升高(P＜0.05),但仍明显低于阳性对照组的水平((P＜0.05).结论 负载供体抗原的CD4+CD25+Treg能够有效抑制供体抗原刺激下的B淋巴细胞反应,在这一过程中TGF-β1和CTLA4都发挥了一定作用.
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