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【摘要】 目的：建立冰糖草水提液中总酚酸的含量测定方法。方法：采用分光光度法，以没食子酸为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶0.9）混合液为显色剂，在720nm波长处进行冰糖草中总酚酸的含量测定。结果：所测定总酚酸的线性相关系数为0.9995，精密度≤0.99%，平均回收率为99.4%，RSD≤2.31%，重现性好。结论：该方法简便快、准确、稳定，可作为冰糖草总酚酸含量测定的方法。
【关键词】 冰糖草；总酚酸；含量测定；分光光度法
【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）10-0010-02
Determination of Total Phenolic Acid in Scoparia dulcis
CHEN LizhenAI ZhaohuiCAI LanjieLI JuanZHAI RuiruiFU Yurong
Department of Pharmacy， Hainan Medical College， Haikou 571199， Hainan， P. R. China
Abstract： [WTHZ]Objective[WTBZ] To establish the methods for detection of total phenolic acid in Scoparia dulcis. [WTHZ]Methods[WTBZ] Total phenolic acid was analyzed by spectrophotometry at 720nm. Gallic acid as a reference， the colour reaction agent was the mixture solution of 0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶0.9）. [WTHZ]Results[WTBZ] The linear correlation coefficient of total phenolic acid was 0.9995. The precisions were less than 0.99%； the average recovery was 99.4% with RSD of less 2.31%. [WTHZ]Conclusion[WTBZ] The method was proved to be fast， simple， accurate and reliable for the quality control of gallic acid and total phenolic acid in Scoparia dulcis.
Keywords： Scoparia dulcis；Total Phenolic Acid；Quantitative method；Spectrophotometry
冰糖草为玄参科植物野甘草Scoparia dulcis L.的全草，为多年生草本植物，主要分布于我国广西、海南、广东、福建、台湾及东南亚地区等，别名假甘草、假枸杞、通花草、热痱草、米碎草等[1]。冰糖草作为一种常用的民族药[2]，其味甘，性凉，具有疏风止咳、清热利湿、利水消肿之功效，可用于治疗肺热咳嗽、暑热吐泻、脚气浮肿、咽喉肿痛、湿疹黄疸、热痱、小儿麻痹、麻疹、丹毒等病症[1-3]。目前已有冰糖草质量标准初步研究的报道，主要涉及其显微鉴别、挥发油成分、药理作用等方面的研究[4-6]，未见冰糖草总酚酸含量测定的相关报道。为进一步开发利用该民间习用草药，本文首次建立其水提液中总酚酸的含量的测定方法，为冰糖草的综合开发利用提供理论依据。
1材料
1.1仪器752型分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；1/10万电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；粉碎机（湖南中诚制药机械厂）。
1.2试药冰糖草采自海南省万宁市，经海南医学院药学院曾念开副教授鉴定为玄参科植物野甘草Scoparia dulcis L.的干燥全草，烘干，粉碎，过40目药筛，干燥保存备用；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所）；十二烷基磺酸钠、无水乙醇、三氯化铁、铁氰化钾、浓盐酸均为分析纯；水为双蒸水。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的没食子酸标准品1.12mg，用无水乙醇溶解，定容至50ml量瓶，摇匀，即得22.4μg/ml没食子酸对照品溶液。
2.2供试品溶液的制备精密称取冰糖草粉末0.2g，置圆底烧瓶中，加入15ml双蒸水浸泡过夜，小火微沸提取2次，每次45min，滤过，合并滤液，加双蒸水定容至50ml量瓶，摇匀，即得供试品溶液。
2.3测定方法取待测溶液2.00ml置于25ml比色管，依次准确加入5ml无水乙醇、加0.3%十二烷基磺酸钠2ml及0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶0.9）混合溶液1ml，混匀，于暗处放置5min，再加0.1mol/ml HCl至刻度，混匀，在暗处放置20min。以显色剂为空白，在720nm波长处测定吸光度A[7]。
2.4线性关系考察准确量取对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50ml，分别置于25ml比色管中，按“2.3”项下的方法显色并测定吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程为Y=0.5941X+0.0562（r=0.9995），表明没食子酸含量在0.224～1.344μg/ml范围内，呈良好线性关系。
2.5精密度试验精密称定同一批冰糖草粉末0.2g，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，RSD为0.99%（n=6），表明该方法精密度良好。 2.6稳定性试验精密称定同一批冰糖草粉末0.2g，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，每隔10min测定1次，记录80min内的吸光度值，RSD为2.02%（n=8），表明供试品溶液在显色后60min内稳定。
2.7重现性试验取同一批冰糖草粉末6份，各0.2g，精密称定，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，记录吸光度值，并计算含量，RSD为1.85%（n=6），表明该方法重现性良好。
2.8加样回收率取同一批已知含量的冰糖草粉末9份，各0.1g，精密称定，分别准确加入高、中、低量的没食子酸对照品，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，记录吸光度值，计算回收率，平均回收率为97.3%，RSD为2.31%（n=9），结果见表1。
[FL）][KH-*1]
表1加标回收率测定结果（n=9）
序号样品重/mg样品含量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%x RSD/%
1100.34.763.818.3995.28
2100.24.693.758.3697.87
3100.34.783.838.5698.69
4100.34.934.939.88100.41
5100.44.974.9710.02101.6199.42.31
6100.44.894.899.7799.80
7100.34.885.8510.5697.09
8100.44.855.8210.75101.37
9100.44.845.8010.76102.07
2.9样品含量测定取同一批冰糖草粉末6份，各0.2g，精密称定，按“2.2”项下的方法进行提取，同““2.3”项下的方法显色并测定吸光度，记录吸光度值，并计算总酚酸含量，结果见表2。
表2冰糖草中总酚酸含量测定结果（n=6）
吸光度值0.4200.4310.4340.4280.4250.424
含量/mg/g47.7249.1449.4848.7248.3348.20
x48.60
RSD/%1.33
3结论
本文以没食子酸为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶0.9）为显色剂，采用分光光度法对冰糖草中总酚酸进行含量测定，结果表明该方法简便、快速，重现性好，精密度、稳定性均满足含量测定要求，准确可靠，故可用于冰糖草的质量控制及定量分析，为民间常用草药冰糖草的应用提供了理论参考依据，为冰糖草资源进一步开发利用提供科学依据。然而，冰糖草的研究还处于初级阶段，总酚酸的具体成分有待进一步分析，其相关的活性作用还需深入研究。
参考文献
[1] 江苏新医学院.中药大辞典（下册）[M].上海：上海人民出版社，1977：2132.
[2] 朱华.中国壮药志（第1卷）[M].南宁：广西民族出版社，2003：407.
[3] 国家中医药管理局.中华本草（第7册）[M].上海：上海科学技术出版社，1998：389.
[4] 李宗友，倪慕云.野甘草的化学、药理[J].国外医学：中医中药分册，1994，16（2）：11.
[5] 姚亮，黄健军.冰糖草挥发油化学成分的GC-MS分析[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（5）：101-103.
[6] 马雯芳，邓慧连，蔡毅，等.壮药冰糖草质量标准初步研究[J].广西中医药，2012，35（4）：51-53.
[7] 付煜荣，陈桂敏.景天三中七总酚酸提取条件及含量分析研究[J].河北北方学院学报，2005，21（6）：25-27.
（收稿日期：2015.02.25）
【关键词】 冰糖草；总酚酸；含量测定；分光光度法
【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）10-0010-02
Determination of Total Phenolic Acid in Scoparia dulcis
CHEN LizhenAI ZhaohuiCAI LanjieLI JuanZHAI RuiruiFU Yurong
Department of Pharmacy， Hainan Medical College， Haikou 571199， Hainan， P. R. China
Abstract： [WTHZ]Objective[WTBZ] To establish the methods for detection of total phenolic acid in Scoparia dulcis. [WTHZ]Methods[WTBZ] Total phenolic acid was analyzed by spectrophotometry at 720nm. Gallic acid as a reference， the colour reaction agent was the mixture solution of 0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶0.9）. [WTHZ]Results[WTBZ] The linear correlation coefficient of total phenolic acid was 0.9995. The precisions were less than 0.99%； the average recovery was 99.4% with RSD of less 2.31%. [WTHZ]Conclusion[WTBZ] The method was proved to be fast， simple， accurate and reliable for the quality control of gallic acid and total phenolic acid in Scoparia dulcis.
Keywords： Scoparia dulcis；Total Phenolic Acid；Quantitative method；Spectrophotometry
冰糖草为玄参科植物野甘草Scoparia dulcis L.的全草，为多年生草本植物，主要分布于我国广西、海南、广东、福建、台湾及东南亚地区等，别名假甘草、假枸杞、通花草、热痱草、米碎草等[1]。冰糖草作为一种常用的民族药[2]，其味甘，性凉，具有疏风止咳、清热利湿、利水消肿之功效，可用于治疗肺热咳嗽、暑热吐泻、脚气浮肿、咽喉肿痛、湿疹黄疸、热痱、小儿麻痹、麻疹、丹毒等病症[1-3]。目前已有冰糖草质量标准初步研究的报道，主要涉及其显微鉴别、挥发油成分、药理作用等方面的研究[4-6]，未见冰糖草总酚酸含量测定的相关报道。为进一步开发利用该民间习用草药，本文首次建立其水提液中总酚酸的含量的测定方法，为冰糖草的综合开发利用提供理论依据。
1材料
1.1仪器752型分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；1/10万电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；粉碎机（湖南中诚制药机械厂）。
1.2试药冰糖草采自海南省万宁市，经海南医学院药学院曾念开副教授鉴定为玄参科植物野甘草Scoparia dulcis L.的干燥全草，烘干，粉碎，过40目药筛，干燥保存备用；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所）；十二烷基磺酸钠、无水乙醇、三氯化铁、铁氰化钾、浓盐酸均为分析纯；水为双蒸水。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的没食子酸标准品1.12mg，用无水乙醇溶解，定容至50ml量瓶，摇匀，即得22.4μg/ml没食子酸对照品溶液。
2.2供试品溶液的制备精密称取冰糖草粉末0.2g，置圆底烧瓶中，加入15ml双蒸水浸泡过夜，小火微沸提取2次，每次45min，滤过，合并滤液，加双蒸水定容至50ml量瓶，摇匀，即得供试品溶液。
2.3测定方法取待测溶液2.00ml置于25ml比色管，依次准确加入5ml无水乙醇、加0.3%十二烷基磺酸钠2ml及0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶0.9）混合溶液1ml，混匀，于暗处放置5min，再加0.1mol/ml HCl至刻度，混匀，在暗处放置20min。以显色剂为空白，在720nm波长处测定吸光度A[7]。
2.4线性关系考察准确量取对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50ml，分别置于25ml比色管中，按“2.3”项下的方法显色并测定吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程为Y=0.5941X+0.0562（r=0.9995），表明没食子酸含量在0.224～1.344μg/ml范围内，呈良好线性关系。
2.5精密度试验精密称定同一批冰糖草粉末0.2g，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，RSD为0.99%（n=6），表明该方法精密度良好。 2.6稳定性试验精密称定同一批冰糖草粉末0.2g，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，每隔10min测定1次，记录80min内的吸光度值，RSD为2.02%（n=8），表明供试品溶液在显色后60min内稳定。
2.7重现性试验取同一批冰糖草粉末6份，各0.2g，精密称定，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，记录吸光度值，并计算含量，RSD为1.85%（n=6），表明该方法重现性良好。
2.8加样回收率取同一批已知含量的冰糖草粉末9份，各0.1g，精密称定，分别准确加入高、中、低量的没食子酸对照品，按“2.2”项下的方法进行提取，同“2.3”项下的方法显色并测定吸光度，记录吸光度值，计算回收率，平均回收率为97.3%，RSD为2.31%（n=9），结果见表1。
[FL）][KH-*1]
表1加标回收率测定结果（n=9）
序号样品重/mg样品含量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%x RSD/%
1100.34.763.818.3995.28
2100.24.693.758.3697.87
3100.34.783.838.5698.69
4100.34.934.939.88100.41
5100.44.974.9710.02101.6199.42.31
6100.44.894.899.7799.80
7100.34.885.8510.5697.09
8100.44.855.8210.75101.37
9100.44.845.8010.76102.07
2.9样品含量测定取同一批冰糖草粉末6份，各0.2g，精密称定，按“2.2”项下的方法进行提取，同““2.3”项下的方法显色并测定吸光度，记录吸光度值，并计算总酚酸含量，结果见表2。
表2冰糖草中总酚酸含量测定结果（n=6）
吸光度值0.4200.4310.4340.4280.4250.424
含量/mg/g47.7249.1449.4848.7248.3348.20
x48.60
RSD/%1.33
3结论
本文以没食子酸为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶0.9）为显色剂，采用分光光度法对冰糖草中总酚酸进行含量测定，结果表明该方法简便、快速，重现性好，精密度、稳定性均满足含量测定要求，准确可靠，故可用于冰糖草的质量控制及定量分析，为民间常用草药冰糖草的应用提供了理论参考依据，为冰糖草资源进一步开发利用提供科学依据。然而，冰糖草的研究还处于初级阶段，总酚酸的具体成分有待进一步分析，其相关的活性作用还需深入研究。
参考文献
[1] 江苏新医学院.中药大辞典（下册）[M].上海：上海人民出版社，1977：2132.
[2] 朱华.中国壮药志（第1卷）[M].南宁：广西民族出版社，2003：407.
[3] 国家中医药管理局.中华本草（第7册）[M].上海：上海科学技术出版社，1998：389.
[4] 李宗友，倪慕云.野甘草的化学、药理[J].国外医学：中医中药分册，1994，16（2）：11.
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[7] 付煜荣，陈桂敏.景天三中七总酚酸提取条件及含量分析研究[J].河北北方学院学报，2005，21（6）：25-27.
（收稿日期：2015.02.25）