目的·利用水凝胶微球和新鲜胰腺癌组织原代细胞构建模拟肿瘤微环境的体外培养新模型。方法·记录水凝胶微球的形态分布情况，倒置荧光显微镜下观察并拍照，通过Image J软件计算微球的直径，统计得到粒径分布图。肾上皮细胞（293T）、胰腺癌细胞（8988）、正常胰腺上皮细胞HPNE均在DMEM完全培养基中生长，当细胞长满到80%～90%时传代。DMEM培养基和微球浸提液培养293T细胞，通过CCK-8法检测2种培养基培养的293T细胞的增殖曲线，探究水凝胶微球的生物相容性。在超净工作台中剪碎新鲜胰腺肿瘤组织，用透明质酸酶和胶原蛋白酶Ⅰ裂解胰腺癌肿瘤组织，在37℃水浴锅中间隔振荡消化为单细胞。水凝胶微球与胰腺细胞在DMEM完全培养基中共培养3 d，半数细胞用4%多聚甲醛固定，鬼笔环肽和DAPI染色，普通荧光显微镜下观察微球的形态和细胞分布；剩余一半细胞用于悬浮细胞和黏附细胞计数。水凝胶微球与原代细胞在培养基中共培养7 d，用免疫荧光法观察基于水凝胶微球建立的胰腺癌原代细胞体外培养模型中的细胞组成。用石蜡包埋胰腺癌组织，随后进行石蜡组织切片，苏木精-伊红染色组织切片，用显微镜观察胰腺癌组织结构。结果·水凝胶微球大小均一，微球粒径约200μm,293T细胞的增殖曲线表明水凝胶微球具有良好的生物相容性。水凝胶微球与胰腺细胞系共培养结果表明水凝胶微球表面具有较强的细胞亲和力，能够为胰腺细胞提供支撑点，使其黏附在微球表面正常生长。水凝胶微球与消化后的胰腺癌新鲜组织单细胞共培养成功建立胰腺癌体外3D培养模型。该模型具有与胰腺肿瘤组织相似的细胞组成，包含胰腺导管上皮细胞、相似比例的肿瘤干细胞、内皮细胞、成纤维细胞等。结论·基于水凝胶微球建立的胰腺癌原代细胞3D培养模型具有胰腺癌肿瘤微环境的重要特征。