探讨慢病毒介导Yes相关蛋白(YAP)过表达促小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞(miPSC-EC)增殖的机制。
方法诱导小鼠诱导性多能干细胞(miPSC)为内皮细胞(EC)，慢病毒介导质粒pPGK-2Flag-YAP转染miPSC-EC，嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株miPSC-EC/YAP。Western blot验证YAP是否成功转染miPSC-EC，并检测转染YAP后miPSC-EC内人第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)等蛋白的表达，同时应用噻唑蓝(MTT)比色法检测YAP对miPSC-EC增殖的影响。
结果miPSC诱导分化所得细胞形态符合EC特征，几乎都表达EC标志血小板内皮细胞黏附分子(CD31)。Western blot结果显示，转染YAP的miPSC-EC中YAP高表达(未转染细胞YAP几乎不表达)，miPSC-EC/YAP组较未转染组PTEN相对表达量明显降低(0.635±0.017比0.879±0.034, P＝0.023)，p-Akt/相对表达量显著升高(0.450±0.025比0.073±0.018, P＝0.007)。同步化之后24、48、72 h，miPSC-EC/YAP组吸光度(A)值较未转染组显著增加(0.113±0.004比0.077±0.004，P＝0.000；0.368±0.010比0.199±0.006，P＝0.000；0.716±0.004比0.418±0.018，P＝0.000)。
结论成功诱导miPSC为EC，建立过表达YAP的细胞株miPSC-EC/YAP。过表达YAP抑制PTEN的表达，提高Akt磷酸化。YAP可能通过参与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路促进miPSC-EC的增殖。