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采用原生质体分离、菌丝尖端分离和组织分离3种方法对双孢蘑菇（Agaricus bisporus）As2796的退化菌株进行分离,应用灰色关联度分析法综合评价不同分离株的农艺性状,筛选综合性状优于As2796退化菌株的提纯复壮菌株。结果表明,3种分离方法均能获得提纯复壮的菌株,其中原生质体分离株P28的提纯复壮效果最好。