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摘要：目的： 通过测定固肾定喘丸中丹皮酚的含量对其质量进行控制； 方法： 采用高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPL-C），选用XDBC-18076331柱（250mm×4.6mm，10μm，），甲醇-水（45：55）为流动相；柱温：25℃，流速为1.0ml·min-1；测定波长为274nm；进样量：10μL。 结果： 丹皮酚在4.312-107.800μg范围内线性关系良好（A=203.29X+2.74，r=1.0000），平均回收率为99.06%，RSD=0.28%； 结论： 该方法简便、灵敏、准确，可用于固肾定喘丸的质量控制。
关键词： HPLC；固肾定喘丸；丹皮酚
【中图分类号】R286.0 【文献标识码】A 【文章编号】1002-3763（2014）04-0059-01
1.仪器与试药
Agilent1200全自动高效液相色谱仪，Agilent1200系列四元泵，AgilentG1314BVWD1200系列可变波长紫外检测器，Agilent1200化学工作站；KQ-电子分析天平（瑞士METTLERTOLEDO，型号：XS105）。KQ-600DE型数控超声波清洗器甲醇为分析纯；水为去离子水。对照品：丹皮酚对照品 固肾定喘丸由广州白云山敬修堂药业股份有限公司提供
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为Hypersil-C18柱（250mm×4.6mm，10μm，特），甲醇-水（45：55）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长274nm，柱温为室温。理论塔板数应不低于5000，此条件下待测组分与其它组分达到有效分离。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取丹皮酚对照品1mg，置于50ml的容量瓶中，加入甲醇至刻度，作为贮备液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备
精密量取本品0.5g，置于50mL烧瓶里，精确加入甲醇25，用天平称出重量，利用超声波处理30min，放冷，再确定重量，根据溶液的减少量补足甲醇，再摇匀，过滤，取续滤液，即可配制出供试品溶液。
2.2.3阴性对照溶液的制备
阴性对照溶液的制备是按照中药的处方中各种中药的味数的比例确定的，按其工艺，制成不含牡丹皮的空白制剂，制备方法和供试品溶液的制备方法相同。
2.3方法学考察
2.3.1线性范围考察
精密吸取丹皮酚2、4、6、8、10、12μl的对照品溶液进行色谱测定，按“2.1”项所述色谱条件分别测定峰面积。按照横坐标为进样量X（μl），纵坐标为峰面积（mAUS）的参数绘制标准曲线，得出回归方程。丹皮酚的回归方程是：A=203.29X+2.74，相关系数r=1.0000。丹皮酚在4.312-107.800μg范围内有良好线性关系。
2.3.2精密度试验
精密吸取（20.58μg.ml-1）10μl的丹皮酚对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下重复进样6次，测得连翘苷峰面积的平均值为2006.1，RSD为0.69%。
2.3.3稳定性试验
取同一供试品溶液分别于0、2、4、8、24h进样10μl，测定峰面积的平均值为446.3，RSD为0.3%，其结果显示丹皮酚24h内稳定性良好。
2.3.4重复性试验
取同一批号（批号：L01003）固肾定喘丸按供试品溶液制备方法制备5
份供试样品，每份测定2次，测得丹皮酚的平均含量为103.60μg.ml-1，RSD为1.1%。
2.3.5回收率试验
精密吸取已知含量的固肾定喘丸样品（批号：L01003）1ml，分别精密加入10ml丹皮酚对照品贮备液，按供试品溶液制备方法制成加样供试品溶液，吸取加样供试品溶液10μl注入液相色谱仪。按上述方法测定加样供试品溶液中丹皮酚的含量平行操作6份，按“2.1”项色谱条件测定含量，分别计算回收率。2.4样品测定
精密量取丹皮酚对照溶液10μl，供试品溶液10μl分别注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件，计算丹皮酚含量。
3.讨论
3.1有效成分
丹皮酚是中药牡丹皮的有效成分，而且含量较高，故以其为指标，测定其在制剂中的含量，以此来控制固肾定喘丸的质量。
3.2波长的选择
最佳检测波长的选择经查阅文献，丹皮酚对照品溶液在274nm波长处有最大吸收，中国药典2010年版一部牡丹皮含量测定选用274nm作为检测波长[1]，因此实验选择274
nm作为检测波长。
3.3流动相的选择
通过查阅文献[2-10]，发现曾有人采用：乙腈-1%冰乙酸系统、乙腈-水系统、甲醇-乙酸-水系统，通过参照文献和实验结果的基础上，发现发现采用甲醇-水（45：55）时，丹皮酚峰形对称，分离完全，杂质干扰少，基线平直，故采用甲醇-水（45：55）作为流动相。
3.4提取方法
牡丹皮超声提取时间的选择本文选用超声方法提取牡丹皮中丹皮酚，方法简便易行，经比较不同超声提取时间结果表明超声振荡30min，丹皮酚己基本提尽。
3.5峰形
在实验过程中，发现有的峰形不是很好，比如出现肩峰、峰拖尾或出现基线噪声，分析其各自原因及各自的解决方法：（1）出现肩峰可能的原因及解决方法有：①柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件；②柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢。（2）出现峰拖尾可能的原因及解决方法有：①峰干扰：清洁样品，调整流动相；②硅羟基作用：加三乙胺，用碱致钝化柱，增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值，钝化样品；③柱效下降：用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱。（3）出现基线噪声的原因及解决方法有：①气泡：流动相脱气，加柱后背压；②.污染：清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂。
结束语
由于中药成分比较复杂，使用高效液相色谱分析法作为其质量控制的主要方法，这种测量方法分离效果好，分析速度快，灵敏度高，操作自动化，是对中药进行成分分析的一种极有价值的分析技术。实验中也可以体验到方法的优势。采用高效液相色谱法，可以为固肾定喘丸的质量控制提供了快速、准确的测定方法。
参考文献：
[1]国家药典委员会，中华人民共和国药典[S].一部，北京：化学工业出版社，2010：160-161
[2]贾瑞艳，刘影.HPLC法测定六味地黄丸（浓缩丸）中丹皮酚的含量[J].黑龙江医药，2009，22（2）：120-122
[3]寇婉青，开伟华，王蓉，等.HPLC法测定桂枝茯苓丸中丹皮酚的含量[J].安徽医药，2009，13（5）：508-509
关键词： HPLC；固肾定喘丸；丹皮酚
【中图分类号】R286.0 【文献标识码】A 【文章编号】1002-3763（2014）04-0059-01
1.仪器与试药
Agilent1200全自动高效液相色谱仪，Agilent1200系列四元泵，AgilentG1314BVWD1200系列可变波长紫外检测器，Agilent1200化学工作站；KQ-电子分析天平（瑞士METTLERTOLEDO，型号：XS105）。KQ-600DE型数控超声波清洗器甲醇为分析纯；水为去离子水。对照品：丹皮酚对照品 固肾定喘丸由广州白云山敬修堂药业股份有限公司提供
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为Hypersil-C18柱（250mm×4.6mm，10μm，特），甲醇-水（45：55）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长274nm，柱温为室温。理论塔板数应不低于5000，此条件下待测组分与其它组分达到有效分离。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取丹皮酚对照品1mg，置于50ml的容量瓶中，加入甲醇至刻度，作为贮备液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备
精密量取本品0.5g，置于50mL烧瓶里，精确加入甲醇25，用天平称出重量，利用超声波处理30min，放冷，再确定重量，根据溶液的减少量补足甲醇，再摇匀，过滤，取续滤液，即可配制出供试品溶液。
2.2.3阴性对照溶液的制备
阴性对照溶液的制备是按照中药的处方中各种中药的味数的比例确定的，按其工艺，制成不含牡丹皮的空白制剂，制备方法和供试品溶液的制备方法相同。
2.3方法学考察
2.3.1线性范围考察
精密吸取丹皮酚2、4、6、8、10、12μl的对照品溶液进行色谱测定，按“2.1”项所述色谱条件分别测定峰面积。按照横坐标为进样量X（μl），纵坐标为峰面积（mAUS）的参数绘制标准曲线，得出回归方程。丹皮酚的回归方程是：A=203.29X+2.74，相关系数r=1.0000。丹皮酚在4.312-107.800μg范围内有良好线性关系。
2.3.2精密度试验
精密吸取（20.58μg.ml-1）10μl的丹皮酚对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下重复进样6次，测得连翘苷峰面积的平均值为2006.1，RSD为0.69%。
2.3.3稳定性试验
取同一供试品溶液分别于0、2、4、8、24h进样10μl，测定峰面积的平均值为446.3，RSD为0.3%，其结果显示丹皮酚24h内稳定性良好。
2.3.4重复性试验
取同一批号（批号：L01003）固肾定喘丸按供试品溶液制备方法制备5
份供试样品，每份测定2次，测得丹皮酚的平均含量为103.60μg.ml-1，RSD为1.1%。
2.3.5回收率试验
精密吸取已知含量的固肾定喘丸样品（批号：L01003）1ml，分别精密加入10ml丹皮酚对照品贮备液，按供试品溶液制备方法制成加样供试品溶液，吸取加样供试品溶液10μl注入液相色谱仪。按上述方法测定加样供试品溶液中丹皮酚的含量平行操作6份，按“2.1”项色谱条件测定含量，分别计算回收率。2.4样品测定
精密量取丹皮酚对照溶液10μl，供试品溶液10μl分别注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件，计算丹皮酚含量。
3.讨论
3.1有效成分
丹皮酚是中药牡丹皮的有效成分，而且含量较高，故以其为指标，测定其在制剂中的含量，以此来控制固肾定喘丸的质量。
3.2波长的选择
最佳检测波长的选择经查阅文献，丹皮酚对照品溶液在274nm波长处有最大吸收，中国药典2010年版一部牡丹皮含量测定选用274nm作为检测波长[1]，因此实验选择274
nm作为检测波长。
3.3流动相的选择
通过查阅文献[2-10]，发现曾有人采用：乙腈-1%冰乙酸系统、乙腈-水系统、甲醇-乙酸-水系统，通过参照文献和实验结果的基础上，发现发现采用甲醇-水（45：55）时，丹皮酚峰形对称，分离完全，杂质干扰少，基线平直，故采用甲醇-水（45：55）作为流动相。
3.4提取方法
牡丹皮超声提取时间的选择本文选用超声方法提取牡丹皮中丹皮酚，方法简便易行，经比较不同超声提取时间结果表明超声振荡30min，丹皮酚己基本提尽。
3.5峰形
在实验过程中，发现有的峰形不是很好，比如出现肩峰、峰拖尾或出现基线噪声，分析其各自原因及各自的解决方法：（1）出现肩峰可能的原因及解决方法有：①柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件；②柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢。（2）出现峰拖尾可能的原因及解决方法有：①峰干扰：清洁样品，调整流动相；②硅羟基作用：加三乙胺，用碱致钝化柱，增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值，钝化样品；③柱效下降：用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱。（3）出现基线噪声的原因及解决方法有：①气泡：流动相脱气，加柱后背压；②.污染：清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂。
结束语
由于中药成分比较复杂，使用高效液相色谱分析法作为其质量控制的主要方法，这种测量方法分离效果好，分析速度快，灵敏度高，操作自动化，是对中药进行成分分析的一种极有价值的分析技术。实验中也可以体验到方法的优势。采用高效液相色谱法，可以为固肾定喘丸的质量控制提供了快速、准确的测定方法。
参考文献：
[1]国家药典委员会，中华人民共和国药典[S].一部，北京：化学工业出版社，2010：160-161
[2]贾瑞艳，刘影.HPLC法测定六味地黄丸（浓缩丸）中丹皮酚的含量[J].黑龙江医药，2009，22（2）：120-122
[3]寇婉青，开伟华，王蓉，等.HPLC法测定桂枝茯苓丸中丹皮酚的含量[J].安徽医药，2009，13（5）：508-509