【摘 要】
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目的探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响。方法构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-sh Sirt4)的腺病毒并
【机 构】
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感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆医科大学附属第二医院,
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目的探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响。方法构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-sh Sirt4)的腺病毒并且在体外培养大鼠原代心肌细胞,将构建好的腺病毒及其相应的对照腺病毒(Ad-GFP/Ad-U6)分别感染大鼠原代心肌细胞,感染24 h后用PBS或1μmol/L血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理细胞48 h。采用Western blot及Real-time PCR检测GATA4的表达,通过免疫荧光及细胞核分离法检测GATA4的核转运,利用双荧光素酶报告基因法检测GATA4下游分子心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的启动子活性。结果 Sirt4在大鼠原代心肌细胞中不会影响GATA4的蛋白及mRNA水平(P>0.05)。与对照组比较,Sirt4过表达显著增加AngⅡ诱导的GATA4磷酸化,而干扰Sirt4表达降低GATA4的磷酸化水平。在大鼠原代心肌细胞中下调Sirt4表达可以明显抑制AngⅡ引起的GATA4入核;Sirt4过表达显著增加GATA4下游分子ANP、BNP的启动子活性(P<0.01)。结论 Sirt4可以在大鼠原代心肌细胞中促进AngⅡ对GATA4的激活效应。
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