探讨藁本内酯(LIG)对重组人热休克蛋白60(HSP60)诱导的THP－1源性巨噬细胞炎症反应的作用及机制。
方法THP－1细胞经佛波酯诱导分化为巨噬细胞后，以免疫荧光法筛选出髓样分化因子88(MyD88)的siRNA最佳转染浓度。将巨噬细胞分为6组(n＝3)，包括空白对照组(siRNA转染试剂)、模型组(siRNA转染试剂＋HSP60 10 mg/L)、阴性对照组(MyD88阴性对照品＋HSP60 10 mg/L)、RNAi组(MyD88 siRNA＋HSP60 10 mg/L)、LIG组(siRNA转染试剂＋HSP60 10 mg/L＋LIG 20 mg/L)和RNAi＋LIG组(MyD88 siRNA＋HSP60 10 mg/L＋LIG 20 mg/L)。采用Western blot法检测巨噬细胞中MyD88及磷酸化核因子－κB(p－NF－κB)的蛋白表达水平，采用ELISA法检测细胞培养上清液中的肿瘤坏死因子－α(TNF－α)、白细胞介素－6(IL－6)含量。
结果(1)模型组的MyD88(1.196±0.125比0.341±0.063，P<0.01)和p－NF－κB(0.817±0.034比0.312±0.046，P<0.01)蛋白相对表达水平均高于空白对照组；RNAi组的MyD88(0.554±0.043)和p－NF－κB(0.538±0.063)蛋白相对表达水平均低于模型组(P均<0.01)，而高于空白对照组(P均<0.05)；LIG组MyD88(0.694±0.087)及p－NF－κB(0.669±0.043)蛋白相对表达水平均低于模型组(P<0.05或0.01)，而高于RNAi组(P均<0.05)及空白对照组(P均<0.01)；RNAi＋LIG组的MyD88(0.409±0.069)和p－NF－κB(0.395±0.046)蛋白相对表达水平均低于模型组(P均<0.01)及LIG组(P<0.05或0.01)，与空白对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)，p－NF－κB蛋白相对表达水平低于RNAi组(P<0.05)。(2)模型组的TNF－α[(312.24±28.69) ng/L比(5.99±1.03) ng/L，P<0.01]和IL－6[(233.45±57.77) ng/L比(2.25±0.67) ng/L，P<0.01]含量均高于空白对照组；RNAi组的TNF－α[(235.66±25.12) ng/L]和IL－6[(131.59±13.99) ng/L]含量均低于模型组(P均<0.01)；LIG组的TNF－α[(258.13±44.80) ng/L]和IL－6[(175.92±28.27) ng/L]含量均低于模型组(P均<0.05)，而高于空白对照组(P均<0.01)，IL－6含量高于RNAi组(P<0.01)；RNAi＋LIG组的TNF－α[(88.57±16.10) ng/L]和IL－6[(59.99±10.31) ng/L]含量均低于模型组、RNAi组和LIG组(P<0.05或0.01)。
结论MyD88/NF－κB是人热休克蛋白60诱导THP－1源性巨噬细胞发生炎症反应的信号通路之一，藁本内酯可通过该信号通路发挥抗炎作用。