【摘 要】
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为了快速高效地检测小反刍兽疫病毒(PPRV),本研究旨在建立并优化小反刍兽疫N蛋白阻断化学发光抗体检测方法.原核表达并纯化了小反刍兽疫病毒N蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,研制出
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046
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为了快速高效地检测小反刍兽疫病毒(PPRV),本研究旨在建立并优化小反刍兽疫N蛋白阻断化学发光抗体检测方法.原核表达并纯化了小反刍兽疫病毒N蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,研制出PPRVN蛋白的特异性单克隆细胞5F2B10.用纯化的N蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体5F2B10作为阻断抗体,优化反应条件后,确定N蛋白最佳稀释浓度为0.25 μg/mL,阻断抗体的最佳稀释浓度为0.5 μg/mL,待测血清按1∶8稀释后37℃反应1h,底物最佳条件为室温避光5 min.通过检测40份小反刍兽疫病毒阳性血清和40份阴性血清,最终确定阴阳性样品抑制率(PI)临界值为50％.特异性试验证明该方法与山羊痘病毒(GPV)、羊口疮病毒(ORFV)、口蹄疫病毒(FMDV)的阳性血清不发生交叉反应.通过对220份绵羊血清样品进行检测,该方法与商品化试剂盒的符合率为94.5％ (208/220).上述结果表明,建立的阻断化学发光抗体检测方法可用于PPRV临床样品的抗体水平检测,为PPRV疫苗免疫效果检验及PPRV根除提供了新的方法.
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