检测方法大PK

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  作者按:
   随着对人乳头瘤病毒的深入研究,HPV的检测技术也不断进步,HPV检测在宫颈癌筛查、治疗、评估疗效及监测预后中发挥了重要作用。临床应用的这些检测技术各有所长,也有所短,该如何选择呢?
  传统的检测方法
   传统方法主要通过形态学方法(包括细胞学、组织学、电镜检查等)和免疫学方法(免疫组化法)对其检测。传统方法操作容易,成本较低,准确度较差,特异性和灵敏度均不够理想,存在较高的假阳性率和假阴性率,且不便于对HPV进行分型,目前较少应用。
  PCR类检测方法
   包括导流杂交基因芯片技术、实时荧光定量PCR法和流式荧光杂交法检测等。PCR 是基于核酸杂交的原理,设计与HPV-DNA互补的一对特异性核酸引物,如果体内存在HPV,则可以HPV-DNA为模板进行体外扩增,检测结果阳性。PCR 方法有极高的敏感度,同时可进行HPV分型检测。缺点是易受污染,假阳性率高,实验条件要求严格,临床应用受到限制。
  核酸杂交法
   核酸杂交检测的特异性和灵敏度均显著高于传统检测方法,并且可应用特异性探针对HPV进行分型。目前已有多种用于HPV-DNA检测的核酸杂交检测方法,如核酸印迹原位杂交、斑点杂交、原位杂交。
   原位杂交法主要检测蜡块组织中的HPV,假阳性较高,灵敏性不高,不适合大规模筛查和临床使用。
   核酸印迹原位杂交灵敏度较高,但不能达到临床所需的灵敏度,且繁琐、费时耗力,不适于大通量临床样品的筛查,目前临床使用较少,主要用于实验室研究。
   斑点印迹法的敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用,但实验过程存有放射性污染,是环保所不能轻视的问题。
  杂交捕获
   第二代杂交捕获法由美国Digene公司所创,可同时检测13种高危型HPV(16、18、3l、33、35、39、
  45、5l、52、56、58、59和68)。优点是操作简单,检测方法统一、标准化,不同实验室之间可比性强,重复性好;自动化程度高,仪器判读结果,可避免人为错误;高敏感,更适于大规模人群的筛查。中国医学科学院肿瘤研究所一项比较研究结果显示,HPV-DNA捕获法检测的灵敏度和特异度分别为95%和85%。该方法得到美国食品药品管理局认证,并在全世界范围内广泛用于临床宫颈癌的筛查和复查。缺点是不能对HPV分型,任何一种型别的HPV-DNA超过阈值,其检测结果均为阳性。
  基因芯片技术
   基因芯片法是采用基因信号放大技术、导流杂交法并结合基因芯片技术,通过DNA提取,PCR基因扩增,在基因芯片上杂交,显色,即可判定结果。可同时检测多种HPV亚型,是检测HPV多重感染的有效方法,真正实现了基因分析所具备的大规模、并行性、高效、自动化特点,敏感和特异性均高,是目前最前沿的HPV分型检测手段。但该技术尚存一些亟待解决的问题,如有效合成芯片探针、提高芯片的特异性及增加信号检测灵敏度等。
  选择HPV 检测方法应该注意的问题
   ⑴敏感度:分析对比敏感度与临床敏感度;
   ⑵重复性;
   ⑶临床认证:未经临床验证的HPV 检测方法是不安全的,分析敏感度不等于临床敏感度,提高分析敏感度会导致临床特异度降低。
   目前临床上比较广泛应用的非HPV分型检测方法是杂交捕获二代技术。该法已得到世界范围的认可,广泛应用于宫颈癌的筛查和随诊。HPV 分型检测在临床上更适合高危型HPV检测阳性而细胞学检查阴性的女性的进一步分流管理。
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