【摘 要】
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转录因子Tbx3（T-box3）在调控动物个体的正常发育中扮演重要角色。本研究克隆水牛（Bubalus bubalis）Tbx3基因，对其进行生物信息学分析，并检测其在水牛不同发育阶段早期胚胎、不同类型细胞以及不同组织的表达情况，初步探讨Tbx3在水牛胚胎发育过程中的作用。根据GenBank上已登录的牛（Bos taurus）、山羊（Capra hircus）等物种的Tbx3基因序列设计特异性引物
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31902125、31972996）； 广西创新驱动发展基金项目（桂科AA17204051）； 广西自然科学基金项目（2012GXNSFBA053057）共同资助；
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转录因子Tbx3（T-box3）在调控动物个体的正常发育中扮演重要角色。本研究克隆水牛（Bubalus bubalis）Tbx3基因，对其进行生物信息学分析，并检测其在水牛不同发育阶段早期胚胎、不同类型细胞以及不同组织的表达情况，初步探讨Tbx3在水牛胚胎发育过程中的作用。根据GenBank上已登录的牛（Bos taurus）、山羊（Capra hircus）等物种的Tbx3基因序列设计特异性引物，利用RT-PCR技术和T-A克隆技术克隆水牛Tbx3基因，利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测、分析水牛Tbx3基因的表达谱。结果显示，克隆获得的水牛Tbx3基因长度为3 291 bp,包含了编码728个氨基酸的编码区及其5′端1 kb非编码区片段。水牛Tbx3基因与牛、绵羊（Ovis aries）、猪（Susscrofa domestica）、黑猩猩（Pan troglodytes）、小鼠（Mus musculu）Tbx3基因的相似性分别为97%、98%、90%、88%和85%,且在不同物种间高度保守，符合生物进化规律。蛋白质结构预测分析软件提示，Tbx3蛋白包含59.48%无规则卷曲、32.28%α-螺旋、8.24%伸展串，为亲水不稳定的碱性蛋白。RT-qPCR结果显示Tbx3在水牛早期胚胎的四细胞、八细胞期不表达，在二细胞期、桑椹胚期少量表达，在囊胚期表达量最高；在水牛颗粒细胞中不表达，在胎儿成纤维细胞、骨髓间充质干细胞中有少量表达，在类胚胎干细胞中表达量最高；Tbx3在水牛卵巢、心脏、睾丸、脑、胚胎生殖嵴中少量表达，脾脏、肝脏表达更高，肾脏、肌肉中表达量最高。本研究发现水牛Tbx3基因的表达具有时空特异性，提示其在水牛早期胚胎细胞谱系分化中起重要作用，但具体作用机制尚需进一步研究阐明。
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