【摘 要】
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为进一步拓展褐藻胶裂解酶在枯草芽孢杆菌体系中的高效表达，该研究以来源于海洋嗜盐白蚁菌WX （Isoptericola halotolerans WX）的一段褐藻胶裂解酶基因aly-ih为目的片段，成功构建Bacillus subtilis-pMA5-aly-ih工程菌，并利用启动子改造与培养基优化的方法提高酶催化活性。采用同源重组方法，将内源性启动子HpaII替换为mpr，Aly-IH酶活较初始酶
【机 构】
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糖化学与生物技术教育部重点实验室江南大学生命科学与健康工程学院
【基金项目】
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国家重点研发计划专项子课题（2021YFC2102000）； 宁夏回族自治区重点研发计划（2020BFH02011）；
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为进一步拓展褐藻胶裂解酶在枯草芽孢杆菌体系中的高效表达，该研究以来源于海洋嗜盐白蚁菌WX （Isoptericola halotolerans WX）的一段褐藻胶裂解酶基因aly-ih为目的片段，成功构建Bacillus subtilis-pMA5-aly-ih工程菌，并利用启动子改造与培养基优化的方法提高酶催化活性。采用同源重组方法，将内源性启动子HpaII替换为mpr，Aly-IH酶活较初始酶活提高至4倍；进一步通过启动子的串联多拷贝提高酶活，当拷贝数为3时，重组酶酶活较初始酶活提高至5.1倍。在此基础上，优化发酵培养基配方，在16 g/L甘油、16 g/L大豆蛋白胨、25 mmol/L Mn2+的培养条件下，Aly-IH酶活提高到320 U/mL，是初始酶活的10.7倍。该酶可高效降解褐藻胶得到平均聚合度为2.3的寡糖产物。研究结果表明，经枯草芽孢杆菌表达并改造优化的褐藻胶裂解酶Aly-IH具有良好的催化性能和应用潜力。
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