aFGF荧光分子探针基因的合成及其表达

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【摘要】

：

通过PCR技术和体外DNA重组技术将绿色荧光蛋白cDNA和酸性成纤维细胞生长因子cDNA构建成融合基因,克隆到表达载体pET3c中,构建成表达菌株BL21(DE3)/pET3c-GAF.经IPTG诱导表达,

【作者】

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庞实锋郑青黄亚东周汝滨李校堃

【机构】

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广东医学院生物学教研室,暨南大学药学院生物制药教研室,暨南大学医药生物技术研究开发中心,广东省生物技术与生物药物重点实验室

【出处】

：

中国生物工程杂志

【发表日期】

：

2005年10期

【关键词】

：

aFGF荧光分子探针基因合成基因表达 PCR技术绿色荧光蛋白酸性成纤维细胞生长因子 Acidic fibroblast growth factor Gr

【基金项目】

：

国家高技术研究发展计划(863计划)，国家自然科学基金

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通过PCR技术和体外DNA重组技术将绿色荧光蛋白cDNA和酸性成纤维细胞生长因子cDNA构建成融合基因,克隆到表达载体pET3c中,构建成表达菌株BL21(DE3)/pET3c-GAF.经IPTG诱导表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25%;DNA测序结果表明设计合成的融合基因与预期相符.Western blot结果表明重组蛋白具有aFGF的免疫原性.经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到强烈的绿色荧光.融合基因在大肠杆菌中实现了表达,用MTT法测得纯化融合蛋白与野生型aFGF促Bla

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