结核分枝杆菌（MTB）通过转录调控系统来快速适应宿主的防御系统与环境变化，从而造成持续感染，但其机制不清。为了研究转录调控蛋白Rv0827c与细菌单杂交预测的23种基因的启动子在体内与体外条件下的结合情况，明确Rv0827c与已确证基因rv3616c启动子结合的影响因素，本研究利用PCR方法从MTBH37Ra株基因组DNA中扩增rv0827c基因后构建了重组质粒pET-22b-rv0827c，经IPTG诱导表达和纯化后获得重组蛋白Rv0827c（rRv0827c），同时以MTBH37Ra株基因组为模板扩增23种基因的启动子。通过体外凝胶迁移试验（EMSA）和体内染色质免疫共沉淀试验（ChIP）对rRv0827c蛋白与这23种基因启动子的相互作用及其互作区域进行检测，结果显示，rRv0827c蛋白与23种启动子均能发生结合，且rRv0827c能够特异性地结合rv3616c（espA）启动子，并结合于大沟区域；表面等离子共振试验（SPR）进一步验证发现rRv0827c能够特异性地结合rv3616c（espA）启动子；通过对影响rRv0827c 和rv3616c 启动子结合的金属离子进行筛选显示，Ni2+、Co2+在体外抑制rRv0827c与rv3616c启动子的结合，而Cr3+则促进两者结合；MEME软件分析23种启动子序列核苷酸的保守性，结果显示，4G和10G为rv3616c启动子与rRv0827c互作的关键核苷酸位点。本研究首次揭示了rRv0827c与多基因启动子结合的广泛性，且直接调控rv3616c的表达，进而可能影响结核分枝杆菌的毒力。