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摘要
[目的]寻找克螨特用于水生动物斑马鱼病虫害防控的安全浓度。[方法]通过室内急性毒性测定试验，设置7个克螨特浓度梯度来检测其对斑马鱼的致死情况，从而计算其半致死浓度（LC50）与安全浓度（SC）。[结果]克螨特对斑马鱼在用药96 h后的LC50为0.909 mg/L，置信区间分别为0.876～0.943 mg/L。克螨特对斑马鱼的SC为0.091 mg/L。[结论]该研究为克螨特杀灭斑马鱼寄生虫的用药量提供了重要的数据支持。
关键词斑马鱼；半致死浓度（LC50）；安全浓度（SC）；克螨特
中图分类号S941；R99文献标识码A文章编号0517-6611（2015）25-138-02
Abstract [Objective] The research aimed to obtain propargite safe concentrations for pest prevention in zebrafish. [Method] In term of the interior of the experimental determination of the acute toxicity test， the research set up 7 concentration gradient of propargite to detect the death quantity of zebrafish， then work out LC50 and SC. [Result] The results showed that zebrafish median lethal concentration （LC50） was 0.909 mg/L after explosion for 96 h to propargite， confidence interval was 0.876-0.943 mg/L. Meanwhile， propargite safe drug concentration to zebrafish was 0.091 mg/L. [Conclusion] This study provides an important data to support for amount of medication propargite kill zebrafish dactylogyrus.
Key words Danio rerio； LC50； SC； Propargite
克螨特，又称炔螨特，英文通用名称Propargite，是美国Uniroyal公司1968年研制成功的高效低毒、无内吸性、低残留、具有触杀和胃毒双重作用的有机硫广谱杀螨剂，有效成分为2-（4-叔丁基苯氧基）环己基丙炔-2-基亚硫酸酯[1]。克螨特在农业上主要用于防治棉花、果蔬、花卉的螨害效果显著[2-4]。然而，近年有研究发现克螨特对寄生于鳗鲡身上的指环虫有很好的治疗效果[5]。斑马鱼（Brachydanio rerio）是一种亚热带淡水鱼类，因其体侧具有象斑马一样纵向的暗蓝与银色相间的条纹而得名，斑马鱼体积小、繁殖快、易于培养、成本低、同时易于给药容易观察，是试验中重要的科研鱼类。笔者通过克螨特对斑马鱼的室内急性毒性测定试验，为今后利用克螨特杀灭斑马鱼的寄生虫疾病提供数据支持。
1材料与方法
1.1试验用鱼
同批同龄的斑马鱼取自广东省湛江市花鸟虫鱼市场，斑马鱼（Brachydanio rerio）体质量为（0.3±0.1）g，全长为（20.0±5.0）mm，雌雄不限，试验前在容积为400 L的大水簇箱中驯养7 d。试验时挑取体格健壮、无伤无病的斑马鱼进行试验。
1.2试验药物
克螨特（Propargite），购自汕头市光华化学厂。
1.3试验条件
养殖用水为曝气充氧除氯24 h以上的自来水，水温（20±3） ℃，pH在7.0左右，总硬度101～103 mg/L，碱度52.21～57.13 mg/L，溶解氧含量5.2～7.1 mg/L。充气使用小型充气泵，饲料为斑马鱼专用饲料。试验是在规格80 L的水族箱中进行，每桶加入药液水50 L。
1.4试验方法
1.4.1
浓度设置。
采用静水试验方法，以4 d为1个试验周期。通过预试验，确定克螨特毒性试验的浓度范围，即96 h 100%死亡浓度（LC100）和0%死亡浓度（LC0）。然后，按照等对数间距法确定克螨特急性毒性试验浓度梯度（表 1），设置7个浓度组和1个对照组进行试验，观察96 h内斑马鱼的反应，每组放30 尾，试验药液现配现用。
待测得克螨特对斑马鱼96 h的半致死浓度（LC50）和安全浓度（SC）后，再进行LC50和SC的可信度验证。设置3个平行组，每组30条鱼。试验所用药液现配现用。
1.4.2
结果观察。试验前24 h 停止投喂饲料，试验开始后的前8 h内连续观察受试鱼的中毒症状及死亡情况，以后不定时进行观察，并于96 h分别记录试验鱼的死亡数和存活数。
1.4.3
指标计算。LC50和95%可信区间的计算采用寇氏法[6]；按照以下公式计算SC：SC=0.1×96 h LC50[7]。
1.4.4
数据处理。使用SPSS 17. 0统计软件对试验数据进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较，P<0.05表示差异显著。
2结果与分析
2.1预试验结果
克螨特对斑马鱼96 h全部死亡的最小剂量（LC100）约为1.2 mg/L，无死亡的最大剂量（LC0）约为0.6 mg/L。 2.2克螨特对斑马鱼的LC50和SC
不同浓度克螨特处理组斑马鱼的死亡数和致死率见表1。根据表1中各浓度克螨特处理组斑马鱼的96 h死亡数和致死率，计算出96 h斑马鱼的LC50为0.909 mg/L，置信区间为0.876～0.943 mg/L，SC为0.091 mg/L。
3讨论
该试验将药物加入斑马鱼所生活的水中，它们会自主连续地从溶液中吸收药物，通过调节水中药物浓度来改变给药剂量。在预试验中发现，随着水中克螨特药物浓度的增加，斑马鱼在一定时间内的死亡率会相应增加，说明产生毒性的药物浓度与斑马鱼的死亡率呈正相关，因此可以用LC50来表示药物毒性大小。笔者随机选取体质健壮且大小均匀的斑马鱼进行试验，每组受试数均为30尾，这为判别药物的作用效果提供了良好条件，大大降低了因为研究材料的质量不佳和数量不足从而导致试验误差较大的可能性。
研究表明，克螨特农药在96 h对鳟鱼LC50为0.118 mg/L[8]，蓝鳃翻车鱼LC50为0.197 mg/L[9]，鲤鱼LC50为1.0 mg/L[10]。笔者通过克螨特农药对斑马鱼毒性的研究发现，96 h克螨特对斑马鱼的LC50为0.909 mg/L。依据试验所得斑马鱼对克螨特LC50和SC进行试验验证。结果表明，斑马鱼在LC50下的理想死亡尾数和实际死亡尾数并没有显著性差异，表明试验结果可信。在克螨特SC条件下饲养96 h，也没有造成斑马鱼的死亡，说明斑马鱼对克螨特SC的结果也可信。这些结果为今后利用克螨特杀灭斑马鱼感染寄生虫的用药量提供了重要的数据基础。
参考文献
[1]
LU X，ISACSSON U.Rheological characterization of styrenebutadienestyrene copolymer modified bitumens[J].Construction and building materials，1997，11（1）：23-32.
[2] 申屠广仁，王建新，朱锡贵，等.克螨特防除桑树螨害的综合研究[J].蚕业科学，1984（3）：3.
[3] 顾言真，吴世昌，沈忠良.克螨特防治蔬菜螨害的研究[J].上海蔬菜，1987（1）：21.
[4] 赵力群，贺达汉，洪坡，等.几种杀螨剂对山楂叶螨的毒力测定[J].植物保护，1998，24（5）：26-27.
[5] 樊海平，余培建，曾占壮，等.吡喹酮和克螨特对寄生欧洲鳗鲡的拟指环虫的效果[J].浙江农业学报，2005，17（1）：25-28.
[6] 李翠萍，吴民耀，王宏元.3 种半数致死浓度计算方法之比较[J].动物医学进展，2012，33（9）：89-92.
[7] 周常义，池信才，黄成，等.三唑磷对四种水生生物的毒性及安全评价研究[J].台湾海峡，2003，22（3）：10-16.
[8] SNCHEZBAYO F.Insecticides mode of action in relation to their toxicity to nontarget organisms[J].Journal of environmental and analytical toxicology，2012，146（2）：117-123.
[9] MUNN M D，GILLIOM R J，MORAN P W，et al.Pesticide toxicity index for freshwater aquatic organisms：USGS Water resources investigations report[M].2nd ed.ProQuest，UMI Dissertation Publishing，2001：66.
[10] ZHU Z L，SHAN Z J，CAI D J.Safety Evaluation of Fenoxycarb on Environmental Organisms[J].Pesticide science and administration，2000，6：5.
[目的]寻找克螨特用于水生动物斑马鱼病虫害防控的安全浓度。[方法]通过室内急性毒性测定试验，设置7个克螨特浓度梯度来检测其对斑马鱼的致死情况，从而计算其半致死浓度（LC50）与安全浓度（SC）。[结果]克螨特对斑马鱼在用药96 h后的LC50为0.909 mg/L，置信区间分别为0.876～0.943 mg/L。克螨特对斑马鱼的SC为0.091 mg/L。[结论]该研究为克螨特杀灭斑马鱼寄生虫的用药量提供了重要的数据支持。
关键词斑马鱼；半致死浓度（LC50）；安全浓度（SC）；克螨特
中图分类号S941；R99文献标识码A文章编号0517-6611（2015）25-138-02
Abstract [Objective] The research aimed to obtain propargite safe concentrations for pest prevention in zebrafish. [Method] In term of the interior of the experimental determination of the acute toxicity test， the research set up 7 concentration gradient of propargite to detect the death quantity of zebrafish， then work out LC50 and SC. [Result] The results showed that zebrafish median lethal concentration （LC50） was 0.909 mg/L after explosion for 96 h to propargite， confidence interval was 0.876-0.943 mg/L. Meanwhile， propargite safe drug concentration to zebrafish was 0.091 mg/L. [Conclusion] This study provides an important data to support for amount of medication propargite kill zebrafish dactylogyrus.
Key words Danio rerio； LC50； SC； Propargite
克螨特，又称炔螨特，英文通用名称Propargite，是美国Uniroyal公司1968年研制成功的高效低毒、无内吸性、低残留、具有触杀和胃毒双重作用的有机硫广谱杀螨剂，有效成分为2-（4-叔丁基苯氧基）环己基丙炔-2-基亚硫酸酯[1]。克螨特在农业上主要用于防治棉花、果蔬、花卉的螨害效果显著[2-4]。然而，近年有研究发现克螨特对寄生于鳗鲡身上的指环虫有很好的治疗效果[5]。斑马鱼（Brachydanio rerio）是一种亚热带淡水鱼类，因其体侧具有象斑马一样纵向的暗蓝与银色相间的条纹而得名，斑马鱼体积小、繁殖快、易于培养、成本低、同时易于给药容易观察，是试验中重要的科研鱼类。笔者通过克螨特对斑马鱼的室内急性毒性测定试验，为今后利用克螨特杀灭斑马鱼的寄生虫疾病提供数据支持。
1材料与方法
1.1试验用鱼
同批同龄的斑马鱼取自广东省湛江市花鸟虫鱼市场，斑马鱼（Brachydanio rerio）体质量为（0.3±0.1）g，全长为（20.0±5.0）mm，雌雄不限，试验前在容积为400 L的大水簇箱中驯养7 d。试验时挑取体格健壮、无伤无病的斑马鱼进行试验。
1.2试验药物
克螨特（Propargite），购自汕头市光华化学厂。
1.3试验条件
养殖用水为曝气充氧除氯24 h以上的自来水，水温（20±3） ℃，pH在7.0左右，总硬度101～103 mg/L，碱度52.21～57.13 mg/L，溶解氧含量5.2～7.1 mg/L。充气使用小型充气泵，饲料为斑马鱼专用饲料。试验是在规格80 L的水族箱中进行，每桶加入药液水50 L。
1.4试验方法
1.4.1
浓度设置。
采用静水试验方法，以4 d为1个试验周期。通过预试验，确定克螨特毒性试验的浓度范围，即96 h 100%死亡浓度（LC100）和0%死亡浓度（LC0）。然后，按照等对数间距法确定克螨特急性毒性试验浓度梯度（表 1），设置7个浓度组和1个对照组进行试验，观察96 h内斑马鱼的反应，每组放30 尾，试验药液现配现用。
待测得克螨特对斑马鱼96 h的半致死浓度（LC50）和安全浓度（SC）后，再进行LC50和SC的可信度验证。设置3个平行组，每组30条鱼。试验所用药液现配现用。
1.4.2
结果观察。试验前24 h 停止投喂饲料，试验开始后的前8 h内连续观察受试鱼的中毒症状及死亡情况，以后不定时进行观察，并于96 h分别记录试验鱼的死亡数和存活数。
1.4.3
指标计算。LC50和95%可信区间的计算采用寇氏法[6]；按照以下公式计算SC：SC=0.1×96 h LC50[7]。
1.4.4
数据处理。使用SPSS 17. 0统计软件对试验数据进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较，P<0.05表示差异显著。
2结果与分析
2.1预试验结果
克螨特对斑马鱼96 h全部死亡的最小剂量（LC100）约为1.2 mg/L，无死亡的最大剂量（LC0）约为0.6 mg/L。 2.2克螨特对斑马鱼的LC50和SC
不同浓度克螨特处理组斑马鱼的死亡数和致死率见表1。根据表1中各浓度克螨特处理组斑马鱼的96 h死亡数和致死率，计算出96 h斑马鱼的LC50为0.909 mg/L，置信区间为0.876～0.943 mg/L，SC为0.091 mg/L。
3讨论
该试验将药物加入斑马鱼所生活的水中，它们会自主连续地从溶液中吸收药物，通过调节水中药物浓度来改变给药剂量。在预试验中发现，随着水中克螨特药物浓度的增加，斑马鱼在一定时间内的死亡率会相应增加，说明产生毒性的药物浓度与斑马鱼的死亡率呈正相关，因此可以用LC50来表示药物毒性大小。笔者随机选取体质健壮且大小均匀的斑马鱼进行试验，每组受试数均为30尾，这为判别药物的作用效果提供了良好条件，大大降低了因为研究材料的质量不佳和数量不足从而导致试验误差较大的可能性。
研究表明，克螨特农药在96 h对鳟鱼LC50为0.118 mg/L[8]，蓝鳃翻车鱼LC50为0.197 mg/L[9]，鲤鱼LC50为1.0 mg/L[10]。笔者通过克螨特农药对斑马鱼毒性的研究发现，96 h克螨特对斑马鱼的LC50为0.909 mg/L。依据试验所得斑马鱼对克螨特LC50和SC进行试验验证。结果表明，斑马鱼在LC50下的理想死亡尾数和实际死亡尾数并没有显著性差异，表明试验结果可信。在克螨特SC条件下饲养96 h，也没有造成斑马鱼的死亡，说明斑马鱼对克螨特SC的结果也可信。这些结果为今后利用克螨特杀灭斑马鱼感染寄生虫的用药量提供了重要的数据基础。
参考文献
[1]
LU X，ISACSSON U.Rheological characterization of styrenebutadienestyrene copolymer modified bitumens[J].Construction and building materials，1997，11（1）：23-32.
[2] 申屠广仁，王建新，朱锡贵，等.克螨特防除桑树螨害的综合研究[J].蚕业科学，1984（3）：3.
[3] 顾言真，吴世昌，沈忠良.克螨特防治蔬菜螨害的研究[J].上海蔬菜，1987（1）：21.
[4] 赵力群，贺达汉，洪坡，等.几种杀螨剂对山楂叶螨的毒力测定[J].植物保护，1998，24（5）：26-27.
[5] 樊海平，余培建，曾占壮，等.吡喹酮和克螨特对寄生欧洲鳗鲡的拟指环虫的效果[J].浙江农业学报，2005，17（1）：25-28.
[6] 李翠萍，吴民耀，王宏元.3 种半数致死浓度计算方法之比较[J].动物医学进展，2012，33（9）：89-92.
[7] 周常义，池信才，黄成，等.三唑磷对四种水生生物的毒性及安全评价研究[J].台湾海峡，2003，22（3）：10-16.
[8] SNCHEZBAYO F.Insecticides mode of action in relation to their toxicity to nontarget organisms[J].Journal of environmental and analytical toxicology，2012，146（2）：117-123.
[9] MUNN M D，GILLIOM R J，MORAN P W，et al.Pesticide toxicity index for freshwater aquatic organisms：USGS Water resources investigations report[M].2nd ed.ProQuest，UMI Dissertation Publishing，2001：66.
[10] ZHU Z L，SHAN Z J，CAI D J.Safety Evaluation of Fenoxycarb on Environmental Organisms[J].Pesticide science and administration，2000，6：5.