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摘要[目的] 探讨紫锥菊复方对仔猪的免疫功能的影响，以期为其今后临床应用提供理论依据。[方法]在仔猪日粮中添加不同剂量的紫锥菊复方，检测仔猪外周血淋巴细胞的转化率以及猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗的抗体水平，研究紫锥菊复方对猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗免疫效果的影响。[结果]一定剂量的紫锥菊复方能显著提高仔猪外周血淋巴细胞转化率（P<0.05），极显著提高猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗的抗体水平（P<0.01）。[结论]中药紫锥菊复方对仔猪的免疫功能具有一定的促进作用。
关键词紫锥菊复方；猪呼吸繁殖障碍综合征；抗体；淋巴细胞转化率
中图分类号S852.65+1文献标识码A文章编号0517-6611（2015）14-119-02
Abstract[Objective] The research aimed to study the effects of Echinacea purpurea compound on the immune functions of piglets and provide theoretical basis for its clinical application in the future. [Method] Different doses of E. purpurea compound were added in the diet of piglets to detect the transformation rate of lymphocyte in peripheral blood of piglets and antibody levels of swine fever and porcine reproductive respiratory syndrome vaccine. The influences of E. purpurea compound on the immune effects of PRRS vaccine were studied. [Result] Different doses of E. purpurea compound could significantly enhance the transformation rate of lymphocyte in peripheral blood of piglets（P<0.05） and extremely significantly improve the antibody levels of swine fever and porcine reproductive respiratory syndrome vaccine（P<0.01）. [Conclusion] The traditional Chinese medicine E. purpurea compound played an important role in promoting immune functions of piglets.
Key wordsEchinacea purpurea compound； PRRS； Antibody； Lymphocyte transformation rate
现代医学研究发现紫锥菊多糖和黄芪多糖具有免疫调节作用，能够提高机体的特异性和非特异性免疫功能，它能提高淋巴细胞的转化率、提高机体对抗原的免疫应答能力[1-4]。根据2种多糖能增强小鼠和鸡等动物免疫功能的研究报道[5-8]，针对仔猪消化吸收能力差、抗病力低、易腹泻等特点，笔者制备了2种中药组成的方剂——紫锥菊复方，用不同剂量的紫锥菊复方饲喂仔猪后，检测仔猪外周血淋巴细胞的转化率以及猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗的抗体水平，来探讨紫锥菊复方对仔猪的免疫功能的影响，以期为其今后临床应用提供理论依据。
1材料与方法
1.1中草药与试验试剂紫锥菊、黄芪等均购自秦皇岛市百草堂大药房。上海快灵牌胶体金试纸条，用于猪繁殖呼吸障碍综合征抗体效价测定。
1.2试验动物80头杜×长×大三元杂交仔猪，由秦皇岛市某种猪场提供。
1.3复方中药制剂的制备清洗除去杂质，筛选出不合格的或混入的非中药成分，除去灰尘，湿润中药原料。药物浸泡3 h，水提3次（ 每次10倍量水，煎煮1 h），经过滤过-浓缩-喷雾干燥-分装的流程制成颗粒状制剂（1 g生药提取中药制剂0.24 g）。
1.4试验动物分组及处理选取临床检查健康的15日龄左右杜长大三元杂交仔猪80头，按照性别和体重随机分为4组（对照组、1.5%复方中药制剂组、1.0%复方中药制剂组和0.5%复方中药制剂组），每组20头。
1.5淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验采用形态学检查法，应用非特异性有丝分裂原植物血凝素（PHA）作为刺激物，具体操作参照何昭阳等[9]方法进行。
1.6猪繁殖呼吸障碍综合征抗体水平的测定健康仔猪在20日龄、50日龄免疫猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗，分别在20、30、40、50、60、70、80日龄每组随机选取10头仔猪，于前腔静脉采集全血3 ml，3 000 r/min 离心15 min，分离血清，-20 ℃冰箱中保存，使用胶体金试纸条按照检测试剂盒说明书进行抗体检测。
1.7数据处理
利用SPSS 11.3GLM程序对试验数据进行统计分析。
2结果与分析
2.1对仔猪T淋巴细胞转化率的影响
由表1可知，在20、30日龄，4组断奶仔猪T淋巴细胞转化率差异均不显著（P>0.05）；在40、50日龄，与对照组相比，0.5%复方中药制剂组仔猪T淋巴细胞转化率分别提高20.48%和19.19%（P<0.01），1.0%复方中药制剂组分别提高13.34%和20.19%（P<0.01），1.5%复方中药制剂组分别提高16.79%和18.47%（P<0.01）；80日龄，与对照组相比1.5%复方中药制剂组仔猪T淋巴细胞转化率提高13.36%（P<0.01）。 2.2猪繁殖呼吸障碍综合征抗体效价
从表2可以看出，免疫合格猪所占比例在60日龄（二免）以后开始升高，达到合格水平（1∶16），因此新生仔猪20日龄免疫1次后，应至少在45～50日龄加强免疫1次，二免后仔猪抗体水平均能达到合格以上，在免疫前后饲料中添加紫锥菊复方效果较好，以1%复方中药制剂组能促进其产生较好免疫力，70～90日龄以后，中和抗体效价与对照组比能提高2.0～2.1 log2。
该试验结果表明，猪繁殖呼吸障碍综合征疫苗接种后，1.5%复方中药制剂组添加紫锥菊复方混饮给药，可以显著提高疫苗免疫的中和抗体水平，与对照组差异显著（P<0.05）。试验组抗体产生快，持续时间长，说明紫锥菊复方对猪繁殖呼吸障碍综合征抗体产生具有明显的促进作用，可有效地提高猪的体液免疫作用。
3讨论
T淋巴细胞在细胞免疫中起主要作用，当其受到PHA等刺激后，可转化为体积较大的淋巴母细胞，可释放多种细胞因子，参与细胞免疫反应。淋巴细胞转化试验结果表明，仔猪外周血淋巴细胞转化率，在试验开始时各组与对照组差异均不显著；40日龄，1.0%复方中药制剂和1.5%复方中药制剂组显著和极显著高于对照组，0.5%复方中药制剂组与对照组差异不显著；在50日龄，1.0%复方中药制剂组和1.5%复方中药制剂组显著高于对照组，0.5%复方中药制剂组与对照组差异不显著。这表明一定剂量的紫锥菊复方能提高仔猪淋巴细胞的转化率，增强仔猪的细胞免疫功能。对猪繁殖呼吸障碍综合征疫苗接种后抗体水平检测结果表明，在试验开始时各组仔猪抗体水平差异不显著，50和70日龄各试验组猪繁殖呼吸障碍综合征抗体水平均极显著高于对照组。在相同日龄条件下，各试验组抗体水平均随紫锥菊复方应用剂量的增加而呈上升趋势。由此可见，应用一定剂量的紫锥菊复方能够提高猪繁殖呼吸障碍综合征疫苗的抗体水平，表明紫锥菊复方对仔猪的体液免疫功能具有一定的促进作用。江和基等[10]饲料中添加玉屏风散提高仔猪免疫球蛋白含量和免疫细胞中CD4（T辅助细胞）和CD8（ T抑制细胞）的比例，增加血清的补体、IL2、γ干扰素等成分，在一定程度上提高猪体内非特异性免疫水平，增强猪体的抵抗力，有利于断奶仔猪的生长发育。刘建成等[11]和马玉芳等[12]也证实了在仔猪、生长肥育猪的饲料中添加一定量的中药添加剂，具有改善猪的生长性能和提高机体免疫功能的作用。这表明在饲料中添加一定量的中草药添加剂对猪的生产性能和免疫功能有改善作用。
笔者通过对仔猪外周血淋巴细胞转化率、猪繁殖呼吸障碍综合征抗体水平等免疫指标的检测，初步探讨了紫锥菊复方对仔猪非特异性免疫功能、体液免疫功能的影响，为进一步研究紫锥菊复方对猪免疫功能的影响奠定了基础。
参考文献
[1] 付海宁，钟英杰，郝卫刚，等.紫锥菊提取物增强鸡新城疫疫苗免疫效果的研究[J].中国家禽，2014，36（24）：13-17.
[2] 宋红卫，李秀菊，岳立.紫锥菊提取物对肉仔鸡免疫功能的影响[J].饲料博览，2014（6）：7-9.
[3] 李宏全，段县平.黄芪多糖对鸡新城疫和传染性腔上囊病疫苗免疫力的影响[J].中国兽医医学杂志，2001，31（9）：12-14.
[4] 张艳.黄芪多糖对烧伤小鼠细胞免疫功能的作用[J].中国药理学通报，1995，11（2）：136-138.
[5] 易先国，雷咸波，何书海，等.紫芪颗粒对小鼠免疫功能的影响[J].中国兽医杂志，2012，48（1）：43-45.
[6] 代雪立，石达友，莫桂芬，等.紫锥菊复方对高温条件下蛋鸡生产性能及血液生化指标的影响[J].中国畜牧兽医，2011，38（9）：15-18.
[7] 李树鹏，郝艳霜，欧阳五庆.黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳的制备及免疫佐剂效应研究[J].西北农林科技大学学报：自然科学版，2011，39（10）：10-16.
[8] 任强，岑国栋，高永翔，等.地奥紫黄精片对小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床，2009，25（2）：109-110.
[9] 何昭阳，胡桂学，王春凤，等.动物免疫学实验技术[M].长春：吉林科学技术出版社，2002：156-157.
[10] 江和基，黄志坚，谢红兵，等.精制玉屏风散对仔猪免疫功能和生长性能的影响[J].福建农林大学学报：自然科学版，2006，35（6）：640-643.
[11] 刘建成，马玉芳，姚金水，等.中药饲料添加剂替代抗菌药物及促生长剂对生长肥育猪生产性能的影响[J].福建农林大学学报：自然科学版，2005，34（4）：509-513.
[12] 马玉芳，刘建成，黄一帆，等.中药饲料添加剂对仔猪生产性能和免疫功能的影响[J].福建农林大学学报：自然科学版，2003，32（4）：496-499.
关键词紫锥菊复方；猪呼吸繁殖障碍综合征；抗体；淋巴细胞转化率
中图分类号S852.65+1文献标识码A文章编号0517-6611（2015）14-119-02
Abstract[Objective] The research aimed to study the effects of Echinacea purpurea compound on the immune functions of piglets and provide theoretical basis for its clinical application in the future. [Method] Different doses of E. purpurea compound were added in the diet of piglets to detect the transformation rate of lymphocyte in peripheral blood of piglets and antibody levels of swine fever and porcine reproductive respiratory syndrome vaccine. The influences of E. purpurea compound on the immune effects of PRRS vaccine were studied. [Result] Different doses of E. purpurea compound could significantly enhance the transformation rate of lymphocyte in peripheral blood of piglets（P<0.05） and extremely significantly improve the antibody levels of swine fever and porcine reproductive respiratory syndrome vaccine（P<0.01）. [Conclusion] The traditional Chinese medicine E. purpurea compound played an important role in promoting immune functions of piglets.
Key wordsEchinacea purpurea compound； PRRS； Antibody； Lymphocyte transformation rate
现代医学研究发现紫锥菊多糖和黄芪多糖具有免疫调节作用，能够提高机体的特异性和非特异性免疫功能，它能提高淋巴细胞的转化率、提高机体对抗原的免疫应答能力[1-4]。根据2种多糖能增强小鼠和鸡等动物免疫功能的研究报道[5-8]，针对仔猪消化吸收能力差、抗病力低、易腹泻等特点，笔者制备了2种中药组成的方剂——紫锥菊复方，用不同剂量的紫锥菊复方饲喂仔猪后，检测仔猪外周血淋巴细胞的转化率以及猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗的抗体水平，来探讨紫锥菊复方对仔猪的免疫功能的影响，以期为其今后临床应用提供理论依据。
1材料与方法
1.1中草药与试验试剂紫锥菊、黄芪等均购自秦皇岛市百草堂大药房。上海快灵牌胶体金试纸条，用于猪繁殖呼吸障碍综合征抗体效价测定。
1.2试验动物80头杜×长×大三元杂交仔猪，由秦皇岛市某种猪场提供。
1.3复方中药制剂的制备清洗除去杂质，筛选出不合格的或混入的非中药成分，除去灰尘，湿润中药原料。药物浸泡3 h，水提3次（ 每次10倍量水，煎煮1 h），经过滤过-浓缩-喷雾干燥-分装的流程制成颗粒状制剂（1 g生药提取中药制剂0.24 g）。
1.4试验动物分组及处理选取临床检查健康的15日龄左右杜长大三元杂交仔猪80头，按照性别和体重随机分为4组（对照组、1.5%复方中药制剂组、1.0%复方中药制剂组和0.5%复方中药制剂组），每组20头。
1.5淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验采用形态学检查法，应用非特异性有丝分裂原植物血凝素（PHA）作为刺激物，具体操作参照何昭阳等[9]方法进行。
1.6猪繁殖呼吸障碍综合征抗体水平的测定健康仔猪在20日龄、50日龄免疫猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗，分别在20、30、40、50、60、70、80日龄每组随机选取10头仔猪，于前腔静脉采集全血3 ml，3 000 r/min 离心15 min，分离血清，-20 ℃冰箱中保存，使用胶体金试纸条按照检测试剂盒说明书进行抗体检测。
1.7数据处理
利用SPSS 11.3GLM程序对试验数据进行统计分析。
2结果与分析
2.1对仔猪T淋巴细胞转化率的影响
由表1可知，在20、30日龄，4组断奶仔猪T淋巴细胞转化率差异均不显著（P>0.05）；在40、50日龄，与对照组相比，0.5%复方中药制剂组仔猪T淋巴细胞转化率分别提高20.48%和19.19%（P<0.01），1.0%复方中药制剂组分别提高13.34%和20.19%（P<0.01），1.5%复方中药制剂组分别提高16.79%和18.47%（P<0.01）；80日龄，与对照组相比1.5%复方中药制剂组仔猪T淋巴细胞转化率提高13.36%（P<0.01）。 2.2猪繁殖呼吸障碍综合征抗体效价
从表2可以看出，免疫合格猪所占比例在60日龄（二免）以后开始升高，达到合格水平（1∶16），因此新生仔猪20日龄免疫1次后，应至少在45～50日龄加强免疫1次，二免后仔猪抗体水平均能达到合格以上，在免疫前后饲料中添加紫锥菊复方效果较好，以1%复方中药制剂组能促进其产生较好免疫力，70～90日龄以后，中和抗体效价与对照组比能提高2.0～2.1 log2。
该试验结果表明，猪繁殖呼吸障碍综合征疫苗接种后，1.5%复方中药制剂组添加紫锥菊复方混饮给药，可以显著提高疫苗免疫的中和抗体水平，与对照组差异显著（P<0.05）。试验组抗体产生快，持续时间长，说明紫锥菊复方对猪繁殖呼吸障碍综合征抗体产生具有明显的促进作用，可有效地提高猪的体液免疫作用。
3讨论
T淋巴细胞在细胞免疫中起主要作用，当其受到PHA等刺激后，可转化为体积较大的淋巴母细胞，可释放多种细胞因子，参与细胞免疫反应。淋巴细胞转化试验结果表明，仔猪外周血淋巴细胞转化率，在试验开始时各组与对照组差异均不显著；40日龄，1.0%复方中药制剂和1.5%复方中药制剂组显著和极显著高于对照组，0.5%复方中药制剂组与对照组差异不显著；在50日龄，1.0%复方中药制剂组和1.5%复方中药制剂组显著高于对照组，0.5%复方中药制剂组与对照组差异不显著。这表明一定剂量的紫锥菊复方能提高仔猪淋巴细胞的转化率，增强仔猪的细胞免疫功能。对猪繁殖呼吸障碍综合征疫苗接种后抗体水平检测结果表明，在试验开始时各组仔猪抗体水平差异不显著，50和70日龄各试验组猪繁殖呼吸障碍综合征抗体水平均极显著高于对照组。在相同日龄条件下，各试验组抗体水平均随紫锥菊复方应用剂量的增加而呈上升趋势。由此可见，应用一定剂量的紫锥菊复方能够提高猪繁殖呼吸障碍综合征疫苗的抗体水平，表明紫锥菊复方对仔猪的体液免疫功能具有一定的促进作用。江和基等[10]饲料中添加玉屏风散提高仔猪免疫球蛋白含量和免疫细胞中CD4（T辅助细胞）和CD8（ T抑制细胞）的比例，增加血清的补体、IL2、γ干扰素等成分，在一定程度上提高猪体内非特异性免疫水平，增强猪体的抵抗力，有利于断奶仔猪的生长发育。刘建成等[11]和马玉芳等[12]也证实了在仔猪、生长肥育猪的饲料中添加一定量的中药添加剂，具有改善猪的生长性能和提高机体免疫功能的作用。这表明在饲料中添加一定量的中草药添加剂对猪的生产性能和免疫功能有改善作用。
笔者通过对仔猪外周血淋巴细胞转化率、猪繁殖呼吸障碍综合征抗体水平等免疫指标的检测，初步探讨了紫锥菊复方对仔猪非特异性免疫功能、体液免疫功能的影响，为进一步研究紫锥菊复方对猪免疫功能的影响奠定了基础。
参考文献
[1] 付海宁，钟英杰，郝卫刚，等.紫锥菊提取物增强鸡新城疫疫苗免疫效果的研究[J].中国家禽，2014，36（24）：13-17.
[2] 宋红卫，李秀菊，岳立.紫锥菊提取物对肉仔鸡免疫功能的影响[J].饲料博览，2014（6）：7-9.
[3] 李宏全，段县平.黄芪多糖对鸡新城疫和传染性腔上囊病疫苗免疫力的影响[J].中国兽医医学杂志，2001，31（9）：12-14.
[4] 张艳.黄芪多糖对烧伤小鼠细胞免疫功能的作用[J].中国药理学通报，1995，11（2）：136-138.
[5] 易先国，雷咸波，何书海，等.紫芪颗粒对小鼠免疫功能的影响[J].中国兽医杂志，2012，48（1）：43-45.
[6] 代雪立，石达友，莫桂芬，等.紫锥菊复方对高温条件下蛋鸡生产性能及血液生化指标的影响[J].中国畜牧兽医，2011，38（9）：15-18.
[7] 李树鹏，郝艳霜，欧阳五庆.黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳的制备及免疫佐剂效应研究[J].西北农林科技大学学报：自然科学版，2011，39（10）：10-16.
[8] 任强，岑国栋，高永翔，等.地奥紫黄精片对小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床，2009，25（2）：109-110.
[9] 何昭阳，胡桂学，王春凤，等.动物免疫学实验技术[M].长春：吉林科学技术出版社，2002：156-157.
[10] 江和基，黄志坚，谢红兵，等.精制玉屏风散对仔猪免疫功能和生长性能的影响[J].福建农林大学学报：自然科学版，2006，35（6）：640-643.
[11] 刘建成，马玉芳，姚金水，等.中药饲料添加剂替代抗菌药物及促生长剂对生长肥育猪生产性能的影响[J].福建农林大学学报：自然科学版，2005，34（4）：509-513.
[12] 马玉芳，刘建成，黄一帆，等.中药饲料添加剂对仔猪生产性能和免疫功能的影响[J].福建农林大学学报：自然科学版，2003，32（4）：496-499.