慢病毒介导shRNA靶向下调过氧化物酶体增殖物激活受体α对全氟十二烷酸致大鼠肝细胞BRL 3A氧化损伤的影响

来源 :卫生研究 | 被引量 : 0次 | 上传用户:algo12
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目的 通过观察慢病毒介导shRNA靶向下调大鼠肝细胞BRL 3A中过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)α的表达,研究PPARα在全氟十二烷酸(perfluorododecanoic acid,PFDoA)致大鼠肝脏氧化损伤中的作用.方法 构建PPARα慢病毒兼容shRNA干扰载体Lenti-iPα和阴性对照载体Lenti-NC,与慢病毒包装辅助质粒共转染293FT细胞进行慢病毒包装,收集慢病毒原液后浓缩并测定病毒滴度.分为NC-组(加阴性对照病毒,不加PFDoA)、NC+组(加阴性对照病毒,加75 μmol/L PFDoA)、iPα-组(加干扰病毒,不加PFDoA)、iPα+组(加干扰病毒,加75μmol/L PFDoA).使用慢病毒处理大鼠肝BRL 3A细胞96 h,最后24 h再对NC+组、iPα+进行75 μmol/L PFDoA暴露.观察BRL 3A细胞中PPARα的干扰情况及PPARα的表达在PFDoA引起活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)变化中所起的作用.结果 慢病毒介导shRNA成功实现靶向下调PPARα的表达,与NC-组相比,iPα-组的大鼠肝细胞系BRL 3A中ROS平均荧光强度为12043.42±808.58,显著升高(P<0.05);PPARα下游靶蛋白酰基辅酶A硫酯酶(acyl-CoA thioesterases,Acot)1的基因和蛋白表达水平(分别为0.43±0.04和0.34±0.08)均显著下降(P<0.05).PFDoA处理后,与NC+组相比,iPα+组大鼠肝细胞BRL 3A中ROS平均荧光强度为12386.25±356.36,显著上升(P<0.05);Acot1的基因和蛋白表达水平(分别为0.85±0.10和0.33±0.04)显著下降(P<0.05).结论 PPARα及其下游靶蛋白Acot1在大鼠肝细胞系BRL 3A中可能起到清除ROS的作用,避免外源物质对肝脏的氧化损伤.
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