人 ENO1基因的克隆及其重组逆病毒载体ENO1-pBABE-Puro 的构建

来源 :实用癌症杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuanzhiboke
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目的:构建含人烯醇化酶1(ENO1)目的基因的重组逆转录病毒载体。方法从人癌细胞中提取总RNA合成cDNA, PCR扩增目的基因ENO1,用sal1和BamH1双酶切ENO1及pbabe质粒,然后用连接酶将ENO1插入pbabe中,最后将重组质粒转化感受态E.coli DH 5α大肠杆菌,提取质粒进行酶切鉴定及 DNA 测序。结果重组逆转录病毒载体ENO1-pBABE-Puro测序结果与GenBank上的序列完全一致,克隆的目的基因已经正确插入到逆转录病毒载体pB-ABE-Puro中。结论成功构建了含有E
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