论文部分内容阅读
目的：本研究通过检测11例血友病B(HB)患者及其中3个血友病B家系中可能携带者的凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变类型及位点,初步探讨血友病B的分子机制,并尝试应用于家系中血友病B携带者的诊断及遗传咨询和产前诊断指导.方法：采集11例血友病B患者及3个家系中可能携带者的外周血标本,提取基因组DNA,并用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出覆盖凝血因子Ⅸ基因外显子区域及其调控区域的序列.运用sanger双脱氧链终止法(The dideoxy chain termination method)对聚合酶链反应产物进行直接测序,得到测序结果反馈后在Blast上进行序列比对.绘出3个家系的家系图谱,结合患者及家系可能携带者的资料对测序结果进行相应分析.结果：①基因分析显示其中10例患者的凝血因子Ⅸ基因突变均位于外显子区域,共有7种类型,其中有2种为错义突变:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.1088G＞T(p.Gly363Val),2种为无义突变c.880C＞T(p.Arg294X)、c.1358G＞A(p.Trp453X),另3种为缺失突变:c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del);1例患者为内含子区域剪接位点突变,c.391+1G＞A.其中:c.943G＞T(p.Asp315Tyr)、c.488delT(p.Ala164GInfs*39)、c.704_708delCAGGT(p.Gly236llefs*10)、c.786_788delTGT(p.Val263del)、c.1358G＞A(p.Trp453X)等5种突变类型为新的突变类型.②3个家系中,家系1、2的先证者基因突变类型分别为c.488delT(p.Ala164GInfs*39)和c.704_708del CAGGT(p.Gly236llefs*10),2家系的可能携带者基因分析结果均未发现突变,所孕胎儿经出生后随访证实FⅨ活性正常;家系3的先证者基因突变类型为c.786_788delTGT(p.Val263del),其母亲经DNA测序分析后证实为携带者,其基因突变类型与家系先证者相同.结论：①基因型的明确为血友病B的发病机制提供了一定的分子基础.②共发现了5种新的FⅨ基因外显子突变,丰富了FⅨ基因突变种类,并有望扩充血友病B的基因突变数据库.⑧为3个家系建立了家系图谱,发现家系携带者1例,对家系的遗传咨询和产前诊断起到了指导作用.