【摘 要】
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目的 微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)是富营养化水中产生的一种常见水污染物,具有很强的生殖毒性.以往研究发现MC-LR 能够诱导中国仓鼠卵巢细胞内质网应激和自噬的发生,但其具体作用机制尚不明确.IRE1 通路是内质网应激通路中的一条重要通路.因此,本研究旨在探索IRE1 通路在MC-LR 诱导小鼠卵巢颗粒细胞自噬中的作用.方法 将KK-1 细胞(来源于小鼠卵巢颗粒细胞)
【机 构】
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郑州大学公共卫生学院,郑州,450001
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的 微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)是富营养化水中产生的一种常见水污染物,具有很强的生殖毒性.以往研究发现MC-LR 能够诱导中国仓鼠卵巢细胞内质网应激和自噬的发生,但其具体作用机制尚不明确.IRE1 通路是内质网应激通路中的一条重要通路.因此,本研究旨在探索IRE1 通路在MC-LR 诱导小鼠卵巢颗粒细胞自噬中的作用.方法 将KK-1 细胞(来源于小鼠卵巢颗粒细胞)暴露于不同干预(对照组：0.9％生理盐水,染毒组：MC-LR 为17μg/mL,si-RNA 阴性对照组(NC),NC+MC-LR组,si-Ire1 组和si-Ire1+MC-LR 组)的培养基中培养24 小时.MDC 染色和荧光共聚焦显微镜检测KK-1 细胞中自噬体的荧光强度.Western Blot 检测KK-1 细胞中IRE1 通路蛋白和自噬相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,在MC-LR 染毒组中IRE1 的磷酸化水平显著增加.IRE1 下游分子c-Jun N 末端激酶(JNK)磷酸化和剪接X-box 结合蛋白1(XBP1s)的表达也被MC-LR 激活,表明MC-LR 诱导KK-1 细胞中IRE1 途径激活.同时,MC-LR 还增加了IRE1 途径中自噬相关蛋白BECLIN1 的表达.为了确定IRE1通路在MC-LR 诱导的KK-1 细胞自噬中的作用,采用siRNA 对Ire1 基因进行沉默.与MC-LR 染毒组相比,在si-Ire1 组和si-Ire1+MC-LR 组中IRE1 和磷酸化的IRE1 表达均降低.MC-LR 诱导的JNK 磷酸化和XBP1s 的表达也被si-Ire1 显著抑制.此外,MC-LR引起的BECLIN1 和LC3Ⅱ 的上调和P62 的降解被显著抑制.在siRNA 干扰下,si-Ire1+MC-LR 组自噬体的荧光强度明显低于NC+MC-LR 组.这些结果表明,Ire1 的沉默降低了MC-LR 诱导的KK-1 细胞的自噬.结论 IRE1 通路介导MC-LR 诱导小鼠卵巢颗粒细胞自噬.
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