【摘 要】
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目的探究miR-454对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的作用。方法对甲状腺乳头状癌细胞系BCPAP进行规范化培养,用CY3标记的荧光对照物与lipofectamine 2000对细胞进行转染,使用荧光显微镜观察荧光下发光的细胞数与同一视野下的细胞总数以确定转染效率。使用lipofectamine 2000分别转染PBS溶液、miR-454抑制物、抑制物对照物、miR-454模拟物和模拟物对
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目的探究miR-454对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的作用。方法对甲状腺乳头状癌细胞系BCPAP进行规范化培养,用CY3标记的荧光对照物与lipofectamine 2000对细胞进行转染,使用荧光显微镜观察荧光下发光的细胞数与同一视野下的细胞总数以确定转染效率。使用lipofectamine 2000分别转染PBS溶液、miR-454抑制物、抑制物对照物、miR-454模拟物和模拟物对照物,依次标记为空白组、抑制物组、抑制物对照组、模拟物组及模拟物对照组。使用实时荧光定量聚合酶链反应（Quantitative real-time PCR,q-PCR）检测转染后miR-454的表达水平;使用CCK-8细胞增殖实验检测细胞增殖能力;单层细胞划痕损伤修复实验检测细胞的迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;使用免疫印迹实验检测RPRD1A及β-catenin蛋白的表达。结果1 CY3标记的荧光对照物转染至细胞内24h后,荧光显微镜下可见转染效率达60%以上。2 q-PCR结果显示,与抑制物对照组相比,抑制物组的miR-454相对表达量明显降低（P＜0.05）;与模拟物对照组相比,模拟物组的miR-454相对表达量明显增高（P＜0.05）。3 CCK-8细胞增殖实验结果显示,在24h、48h、72h及96h时间段,与抑制物对照组相比,抑制物组的光密度值（Optical density value,OD值）明显降低（P＜0.05）;模拟物组的OD值相较模拟物对照组明显升高（P＜0.05）。4单层细胞划痕损伤修复实验结果显示,与抑制物对照组相比,抑制物组的48h划痕愈合率明显降低（P＜0.05）,模拟物组的48h划痕愈合率相较模拟物对照组明显升高（P＜0.05）。5 Transwell侵袭实验结果显示,与抑制物对照组相比,抑制物组穿过小室的细胞数明显减少（P＜0.05）;模拟物组穿过小室的细胞数明显多于模拟物对照组（P＜0.05）。6免疫印迹实验结果显示,与抑制物对照组相比,抑制物组RPRD1A蛋白的表达明显增多（P＜0.05）,β-catenin蛋白的表达明显减少（P＜0.05）。模拟物组RPRD1A蛋白的表达相较模拟物对照组明显减少（P＜0.05）,β-catenin蛋白的表达明显多于模拟物对照组（P＜0.05）。结论1 miR-454促进了甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。2 miR-454可能通过RPRD1A调控Wnt/β-连环蛋白信号传导通路。3 miR-454有希望为今后临床上甲状腺乳头状癌的治疗提供新的思路。图 11 幅;表 2 个;参 142 篇。
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