凝集素广泛存在于动、植物体内，具有多种生物活性，在鱼类胚胎发育早期，各组织还未完全发育之时，对外界病原体仍然有一定的抵御能力，这种抵御能力来自自身非特异性免疫和母源性免疫，而存在于卵母细胞中的凝集素等物质被认为是来自母体的免疫物质，并且极有可能在鱼类胚胎发育过程中发挥重要作用（王志平，2008）。对母源凝集素的研究，有利于对凝集素在鱼类胚胎发育过程中所扮演的角色进行深入了解，以期为鱼类免疫机制的研究奠定基础。在本研究中，首先我们克隆得到了斑马鱼母源凝集素基因zfol，cDNA全长为937bp，包含一个771bp的开放阅读框（ORF），编码256个氨基酸，长73bp的5’非编码区（5’-UTR，5’-untranslated region），长93bp的3’非编码区（3’-UTR，3’-untranslated region）。通过RT-PCR和western-blot对其进行了mRNA水平和蛋白水平的时空表达分析，发现zfol在斑马鱼胚胎发育过程中呈现出动态变化，在斑马鱼胚胎发育初期，zfol mRNA表达量较高，随着胚胎的不断发育，zfol的mRNA表达量有所下降，到后期表达量又上升；斑马鱼成鱼各组织中mRNA水平，除了精巢不表达外，在成鱼肝脏、肾脏、卵巢、脑、心脏中均有表达，且表达量相当。而Zfol蛋白在卵巢中表达量最高，肾脏中也有表达，但是表达量相对较低，而在肝脏、脑、精巢、心脏这些组织中均不表达；在胚胎发育0到4小时时蛋白的表达量较高，6~9小时蛋白表达量下降，12~16小时蛋白表达量又再上升，20~24小时下降，到36小时蛋白表达量升高，而后Zfol蛋白的表达量又下降。为了进一步研究zfol基因在斑马鱼胚胎发育过程中所扮演的角色，我们选择基因敲除技术来研究zfol的功能，构建zfol基因的斑马鱼突变体，在现有的基因敲除技术中，又以TALENs技术最具优势，能够对目的基因的特异序列进行诱变，且突变率高，与其他技术相比，优势明显，故在本研究中我们采用TALENs技术对zfol进行诱变，达到敲除zfol基因的目的。利用TALENs技术，通过设计能够特异性识别zfol目标序列的TALENs，诱导zfol目标序列产生插入或缺失突变，从而导致蛋白翻译提前终止，起到敲除zfol基因的作用，构建zfol的突变体。通过对zfol基因的斑马鱼突变体进行研究，初步了解zfol在斑马鱼胚胎生长发育过程中发挥的功能。对zfol斑马鱼突变体的生长发育过程进行观察发现，缺失zfol后的斑马鱼发育较缓慢，同时对其表型进行分析表明，围心腔处有轻微膨大的现象，这些结果暗示，zfol可能在调控斑马鱼生长发育中发挥一定的作用，同时由于围心腔的膨大通常是链球菌感染引起的，所以初步认为zfol在抵御链球菌感染上发挥一定作用，说明其在斑马鱼生长发育过程中可能发挥一定的免疫保护作用。综上所述，本研究对zfol的克隆及表达谱进行了分析，同时利用TALENs技术，构建了zfol基因的斑马鱼突变体，对其在斑马鱼生长发育过程中的功能做了初步研究，为zfol功能的深入研究奠定了基础。