论文部分内容阅读
目的:糖尿病是一种世界性的、严重的慢性疾病，而作为其并发症的糖尿病视网膜病变(DR)成为发达国家中成年人致盲的首要的因素。结缔组织生长因子(CTGF)可以促进纤维增殖、细胞凋亡和血管生成，近年来有学者开始关注它在DR发生中的作用。在临床上，他汀类降脂药和COX-2类抑制剂运用非常广泛，它们在抑制炎症发展中都对CTGF的下调具有明显的作用。目前国内外尚没有报道它们在眼内抑制CTGF表达的报道。故本实验拟对这两类药物与CTGF的关系做进一步深入研究，希望为DR的发生和治疗提供一些新思路。
方法:
1.将正常雄性Wistar大鼠随机分为4组，给其中3组大鼠按照60mg/kg的剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)，建立糖尿病动物模型；在已经成型的2组动物的饮用水中分别给予氟伐他汀和塞来昔布，治疗达到12周，而另一组糖尿病组大鼠不给任何治疗。
2.取一眼视网膜组织抽提RNA、蛋白质，另一眼固定后作免疫组织化学观察。
3.将RNA反转录出cDNA。
4.运用普通PCR和real-timePCR方法扩增CTGF基因，并安排β-actin作为内对照，比较4组大鼠的CTGF基因水平的表达差异。
5.运用免疫印迹法来检测视网膜在蛋白水平上的CTGF表达差异。
6.使用免疫组织化学方法来观察CTGF在眼内的分布，并比较4组大鼠的差异。
7.运用ELISA法检测4组大鼠房水中CTGF的含量。
结果:
1.运用PCR方法证明，糖尿病大鼠视网膜中CTGF在基因水平上比正常大鼠明显增高；两种药物治疗的大鼠中，CTGF的表达比糖尿病组明显减少。
2.运用免疫印迹法证明：糖尿病大鼠视网膜中CTGF在蛋白质水平上比正常大鼠明显增高；以塞来昔布治疗的大鼠中，CTGF比糖尿病组明显减少，差异具有非常显著的统计学意义；氟伐他汀治疗的大鼠与糖尿病组相比，无显著性差异。
3.运用免疫组织化学方法证明：CTGF主要分布在节细胞层和内核层。糖尿病大鼠视网膜中CTGF阳性的细胞比正常大鼠明显增多，且着色较深；以塞来昔布和氟伐他汀治疗的大鼠中，CTGF阳性的细胞比糖尿病大鼠明显减少，且着色较浅。
4.运用ELISA方法证明：糖尿病大鼠房水中CTGF比正常大鼠明显增高；两种药物治疗的大鼠中，CTGF则比糖尿病组明显减少。
结论:CTGF在眼内主要分布在节细胞层和内核层。使用氟伐他汀和塞来昔布能降低糖尿病大鼠视网膜中CTGFmRNA的表达。使用塞来昔布能降低糖尿病大鼠视网膜中CTGF蛋白质的表达，使用氟伐他汀不能降低糖尿病大鼠视网膜中CTGF蛋白质的表达。使用两种药物均能使房水中CTGF的含量下降。