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脂质代谢紊乱不仅常见于各种肾脏疾病，而且还能够促进肾脏疾病的发生、发展。文献报道肾脏病患者血清三酰甘油(TG)水平与尿白蛋白排泄率(UAE)显著相关，并与GFR的下降也具有显著的关联，提示TG、以及富含TG的脂蛋白如极低密度脂蛋白(VLDL)具有肾脏毒性作用。但是，目前高TG血症的肾毒性并没有被完全证实，其机制也尚未明了。因此希望通过体内实验证明血TG、VLDL升高可造成单肾切除SD大鼠肾脏损害；探讨这种肾损害的机制；并观察降脂药物干预对上述肾脏损害的影响。同时，通过体外实验研究VLDL对大鼠系膜细胞增殖、转化生长因子(TGF-β1)表达、纤维连接蛋白(FN)的蛋白合成的影响以及P42／44MAPK细胞信号转导途径在其中的作用，以此探讨高TG、VLDL血症肾脏毒性的分子生物学机制。 实验方法：本课题分为两个部分进行。 1．体内实验： (1)选择雄性SD大鼠作为实验对象，将所有大鼠左侧肾脏切除，随机分为四组。分别为对照组(Control group,Con)、Exp组(Experimental Group,Exp)、吉非罗齐组(Gemfibrozil group,Gem)和太白楤木皂甙组(araloside group,Ara)。 (2)在实验进行至8、16周时，采血检测大鼠血脂、肾功能、血糖，收集24小时尿，检测大鼠尿白蛋白排泄率(UAE)。 (3)肾脏病理检查，包括油红染色观察脂质沉积情况、常规染色、电镜观察肾脏病变以及电子致密物沉积情况，免疫组化观察肾脏内细胞增殖情况以及免疫荧光镜检观察免疫复合物沉积情况。半定量计数肾小球细胞数，以及肾小球内PAS染色阳性区域面积百分比。 京二早巨大学丸九以俗士学位论文 论文幻耍 （4）分别采用RT－PCR法和Western Blot法检测肾组织TGF－plmRNA转 录以及蛋白质表达情况。 （5）同位素标记法检测肾皮质 P42 MAPK活性。 （6）统计分析血脂与 UAE、肾小球内平均细胞数、肾小球内 PAS阳性物质 面积百分比以及 P42 MAPK活性的相关性。 2 体外实验：以大鼠系膜细胞为研究对象，制备VLDL后与系膜细胞共孵 育并作以下实验 门）采用XTT法、流式细胞术观察其对细胞增殖的影响。 （2）采用 ELISA法检测 VLDL对细胞分泌 FyJ的影响。 （3）采用 Western Blot法以及 RT－PCR法检测 TGF－PI蛋白质表达和 mRNA 转录情况。p （4）采用同位素标记测定 P42 MAPK活性。 （5）P42 MAPK的抑制剂 PD98059阻断后，再观察 VLDL对细胞增殖、TGF－ 61表达以及 P42 MAPK活性的影响。 实验结果： 1．体内实验： （）实验进行到 8周时，Exp组大鼠血清TG、VLDL水平显著升高，血清 Chol、LDL、HDL、血糖、肾功能水平与对照组相比没有显著差异。 经过降脂药物作用后，血清TG、VLDL水平显著下降。 Q）16周时 EXp大鼠 UAE较对照组显著增加；药物干预的组别 UAE显著 降低。 臼）病理结果显示，EXp组肾脏内脂质沉积增加，主要位于肾小管和肾小 球，肾小管较为显著。弥漫性系膜基质增加、局灶节段性甚至球性肾 小球硬化，肾小球内细胞增生；少量肾小管扩张，空泡变性。偶见间 质纤维化。部分中、小动脉玻璃样变，血管壁出现血浆样物质浸润以 4 第二旱巨大小人九以俗士学位论文 论文绚昙 及血管狭窄。还可观察到炎性细胞浸润。免疫组化结果表明EXp组、 Gem组、Ara组肾小球内细胞显著增殖。兔疫荧光镜检结果示Ig G、 Ig M、Ig A、C3、C4均为阴性。电镜结果显示，EXp组肾小球系膜基 质增多，局灶性上皮细胞足突融合，胞浆脱落，未见电子致密物沉积。 另外，药物干预组大鼠肾脏内脂质沉积、肾小球系膜基质扩张以及增 殖明显减轻，但与对照组相比病变仍显著。病理切片半定量结果显示 Exp组、Gem组和 Ara组肾小球内细胞数显著高于对照组。但 Exp组 系膜PAS阳性区面积的百分较对照组显著增加，但Ara组PAS阳性区 面积百分比显著下降。 N）EXp组肾皮质 TGF－61蛋白质表达以及］lRNA转录增强，而经降脂药 物干预的各组大鼠肾脏表达减弱。 6）Exp组肾脏皮质 P42 MAPK活性显著升高hs Con组人但降脂治疗没 有降低 P42 MAPK的活性。