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目的:
本课题通过建立白血病P388/VCR耐药细胞裸鼠模型,观察不同剂量扶正祛邪方与化疗药联合使用后对白血病耐药细胞的逆转作用,同时检测白血病细胞多药耐药蛋白(P-gp)mRNA的表达,进一步探索扶正祛邪中药方逆转白血病细胞耐药可能的作用机制。
方法:
(1)建立白血病P388/VCR耐药细胞裸鼠模型:将P388/VCR细胞置于37℃、5%CO2条件的培养箱中进行培养、传代,至对数生长期(1×107个/ml),以0.2ml/只为接种量,接种于裸鼠的右腋皮下。(2)分组及用药:共72只裸鼠,按随机原则分为6组:正常对照组:蒸馏水灌胃;模型对照组:生理盐水灌胃;单纯VCR组:长春新碱腹腔注射;小剂量中药+VCR组(以下简称小剂量组)、中剂量中药+VCR组(以下简称中剂量组)、大剂量中药+VCR组(以下简称大剂量组):小、中、大剂量扶正祛邪方灌胃+长春新碱腹腔注射。(3)观察裸鼠用药前后的精神状态及活动情况,测量移植瘤的重量、体积,计算抑瘤率。(4)取外周血及骨髓涂片、染色,油镜下观察细胞形态,计算白血病细胞数(原始+早幼粒细胞)。(5)结束给药后实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组P-gp mRNA的表达。
结果:
(1)5组共60只实验裸鼠进行造模(除外正常对照组),其中55只造模成功,成瘤率为91.67%,成瘤时间为7-10天。开始给药后中剂量组及大剂量组裸鼠一般情况有所改善,其余各组裸鼠进一步出现明显消瘦及皮肤皱缩无华,行动迟缓。(2)模型对照组移植瘤生长速度明显高于单纯VCR组及大、中、小剂量组(P<0.05),模型对照组瘤体的体积平均值最大,大、中剂量组瘤体体积均较单纯VCR组小(P<0.05),大、中剂量组瘤体体积与小剂量组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)模型对照组瘤重平均值最大。大、中剂量组瘤重小于单纯VCR组(P<0.05),大、中剂量组抑瘤率显著高于其他组(P<0.05)。(4)各组外周血中的白血病细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);单纯VCR组与大、中、小剂量组骨髓白血病细胞比例均较模型对照组小,差异有统计学意义(P<0.05)。大剂量组骨髓白血病细胞比例较单纯VCR组小,差异具有统计学意义(P<0.05),而单纯VCR组与中、小剂量组骨髓白血病细胞比例组间比较无统计学意义(P>0.05)。(5)移植瘤P-糖蛋白mRNA表达:由高到低依次为:单纯VCR组、小剂量组、中剂量组、大剂量组。单纯VCR组与小剂量组mRNA表达高于正常对照组,大、中剂量组与对照组相比mRNA表达下调(P<0.05)。大剂量组mRNA表达较单纯VCR组低。大、中、小剂量组组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:
(1)扶正祛邪方能提高耐VCR白血病细胞对化疗药的敏感性,提高化疗药物对耐药细胞的效应,抑制P388/VCR耐药细胞裸鼠模型的移植瘤生长。
(2)扶正祛邪方能一定程度上逆转耐VCR白血病细胞耐药,其逆转作用与中药浓度似呈浓度依赖关系。
(3)扶正祛邪方逆转白血病耐药的机制可能与下调P-gp mRNA的表达相关。
本课题通过建立白血病P388/VCR耐药细胞裸鼠模型,观察不同剂量扶正祛邪方与化疗药联合使用后对白血病耐药细胞的逆转作用,同时检测白血病细胞多药耐药蛋白(P-gp)mRNA的表达,进一步探索扶正祛邪中药方逆转白血病细胞耐药可能的作用机制。
方法:
(1)建立白血病P388/VCR耐药细胞裸鼠模型:将P388/VCR细胞置于37℃、5%CO2条件的培养箱中进行培养、传代,至对数生长期(1×107个/ml),以0.2ml/只为接种量,接种于裸鼠的右腋皮下。(2)分组及用药:共72只裸鼠,按随机原则分为6组:正常对照组:蒸馏水灌胃;模型对照组:生理盐水灌胃;单纯VCR组:长春新碱腹腔注射;小剂量中药+VCR组(以下简称小剂量组)、中剂量中药+VCR组(以下简称中剂量组)、大剂量中药+VCR组(以下简称大剂量组):小、中、大剂量扶正祛邪方灌胃+长春新碱腹腔注射。(3)观察裸鼠用药前后的精神状态及活动情况,测量移植瘤的重量、体积,计算抑瘤率。(4)取外周血及骨髓涂片、染色,油镜下观察细胞形态,计算白血病细胞数(原始+早幼粒细胞)。(5)结束给药后实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组P-gp mRNA的表达。
结果:
(1)5组共60只实验裸鼠进行造模(除外正常对照组),其中55只造模成功,成瘤率为91.67%,成瘤时间为7-10天。开始给药后中剂量组及大剂量组裸鼠一般情况有所改善,其余各组裸鼠进一步出现明显消瘦及皮肤皱缩无华,行动迟缓。(2)模型对照组移植瘤生长速度明显高于单纯VCR组及大、中、小剂量组(P<0.05),模型对照组瘤体的体积平均值最大,大、中剂量组瘤体体积均较单纯VCR组小(P<0.05),大、中剂量组瘤体体积与小剂量组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)模型对照组瘤重平均值最大。大、中剂量组瘤重小于单纯VCR组(P<0.05),大、中剂量组抑瘤率显著高于其他组(P<0.05)。(4)各组外周血中的白血病细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);单纯VCR组与大、中、小剂量组骨髓白血病细胞比例均较模型对照组小,差异有统计学意义(P<0.05)。大剂量组骨髓白血病细胞比例较单纯VCR组小,差异具有统计学意义(P<0.05),而单纯VCR组与中、小剂量组骨髓白血病细胞比例组间比较无统计学意义(P>0.05)。(5)移植瘤P-糖蛋白mRNA表达:由高到低依次为:单纯VCR组、小剂量组、中剂量组、大剂量组。单纯VCR组与小剂量组mRNA表达高于正常对照组,大、中剂量组与对照组相比mRNA表达下调(P<0.05)。大剂量组mRNA表达较单纯VCR组低。大、中、小剂量组组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:
(1)扶正祛邪方能提高耐VCR白血病细胞对化疗药的敏感性,提高化疗药物对耐药细胞的效应,抑制P388/VCR耐药细胞裸鼠模型的移植瘤生长。
(2)扶正祛邪方能一定程度上逆转耐VCR白血病细胞耐药,其逆转作用与中药浓度似呈浓度依赖关系。
(3)扶正祛邪方逆转白血病耐药的机制可能与下调P-gp mRNA的表达相关。