【摘 要】
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该研究首先将新城疫病毒(NDV)的保护性抗原基因F插入鸡痘病毒载体pUT-2的复合启动子P7.5-ATI下游,构建成质粒pUTA-2-F.然后利用质粒pKS(-)对鸡痘病毒载体的复合启动子P7.5-AT
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该研究首先将新城疫病毒(NDV)的保护性抗原基因F插入鸡痘病毒载体pUT-2的复合启动子P7.5-ATI下游,构建成质粒pUTA-2-F.然后利用质粒pKS(-)对鸡痘病毒载体的复合启动子P7.5-ATI的下游酶切位点进行改建,再将其插入质粒pUTA-2-F中,使其位于第一个复合启动子P7.5-ATI的上游并且方向相反,最后将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的保护性抗原基因S1插入第二个复合启动子P7.5-ATI的下游,构建成重组质粒pUTA-2-FS1.将重组质粒pUTA-2-FS1传染鸡痘病毒(FPV)鹌鹑化弱毒株(282E4株)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),使其与FPV发生重组,56h后收获病毒.然后利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)进行筛选,筛选出6株TK病毒.间接免疫荧光和Westen blot鉴定,获得了5株表达NDVF蛋白和IBV S1蛋白的重组鸡痘病毒(rFPV).其中在Westrn blot检测中,对NDV F蛋白的检测,出现一条大允90kDa的带.证明两种蛋白都得到了正确的表达和修饰(如糖基化),并且NDV的F蛋白前体F0被裂解成F1和F2.该研究为新城疫-鸡传染性支气管炎-鸡痘三价基因工程疫苗的研制奠定了基础.
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