大鼠骨髓间充质干细胞对不育大鼠生殖系统修复作用的研究

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现代社会的发展为人们的生活提供了丰富的物质保证,但同时人类生殖健康却因环境改变、生活节奏加快和压力增大而不断恶化。其中由于男性因素造成的不孕不育呈明显的上升趋势,少精、弱精和无精症是男性不育的主要原因。要从根本上治疗男性不育症,干细胞是理想的种子细胞,干细胞移植是解决这一难题的根本方法。胚胎干细胞具有分化为精原干细胞的能力,但由于其来源有限、移植于体内的成瘤性、免疫排斥性以及社会伦理道德的制约等限制了其在临床中的应用,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是存在于骨髓中一种非造血组织的间充质干细胞,其储量丰富、取材方便、避免了异体免疫排斥反应,在特定诱导条件下可以向三胚层细胞分化,而骨髓间充质干细胞是否能够分化为雄性生殖细胞,目前少见研究报道。为此,本研究比较了60mg/k、40mg/kg、30mg/kg、20mg/kg、15mg/kg不同剂量白消安、单次和连续多次注射白消安制备大鼠无精症模型的效果。检测了注射后不同时间大鼠睾丸重量、睾丸组织细胞结构、精子密度、活力、畸形率等。同时体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,免疫组化检测骨髓间充质干细胞表面抗原CD44和CD106、生殖细胞表面抗原c-kit基因的表达,将培养的骨髓间充质干细胞移植到无精症大鼠睾丸曲细精管中,移植后30d检测睾丸组织细胞结构、免疫组化检测了CD106、CD44、c-kit基因在睾丸组织细胞中的表达。结果表明:单次注射白消安各组大鼠10d内全部死亡。连续10d腹腔注射白消安累计剂量为20mg/kg(体重)组大鼠全部存活,注射后睾丸形态变小、重量减轻,到30d时重量仅为0.49g,对照组为0.97g,二者间有明显差别。注射白消安30d后睾丸组织中曲细精管内壁仅有1-2层支持细胞,管腔中央少见细胞,对照组睾丸曲细精管管腔中可见大量的生殖细胞,二者间有显著差别。从大鼠股骨腔成功分离培养了骨髓间充质干细胞,免疫组化结果显示CD44表达阳性、CD106表达阳性、c-kit表达阴性。将大鼠骨髓间充质干细胞注射到大鼠睾丸曲细精管中,30d后石蜡切片显示曲细精管管腔中央有新的细胞形成,免疫组织结果显示这些细胞表达生殖细胞表面抗原c-kit基因。结果表明,骨髓间充质干细胞在睾丸中能够分化形成生殖细胞,对受损的不育大鼠曲细精管进行修复,为人类骨髓间充质干细胞自体移植治疗少精症、无精症的临床应用提供理论和实验依据。
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