【摘 要】
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目的观察环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3（circHIPK3）在人神经胶质瘤细胞中的表达水平,探讨circHIPK3通过海绵吸附微小RNA-124-3p（mi R-124-3p）作用对促进神经胶质瘤细胞增殖与侵袭的分子机制及意义,为寻求神经胶质瘤的生物学特点及潜在治疗靶点提供理论依据。方法选取2015年12月至2019年03月间在我院神经外科接受治疗的神经胶质瘤病例为研究对象,遵循纳入标准和排除
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目的观察环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3（circHIPK3）在人神经胶质瘤细胞中的表达水平,探讨circHIPK3通过海绵吸附微小RNA-124-3p（mi R-124-3p）作用对促进神经胶质瘤细胞增殖与侵袭的分子机制及意义,为寻求神经胶质瘤的生物学特点及潜在治疗靶点提供理论依据。方法选取2015年12月至2019年03月间在我院神经外科接受治疗的神经胶质瘤病例为研究对象,遵循纳入标准和排除标准,共纳入30例患者,所有入组患者均行瘤体病灶手术切除治疗。体外培养SVGp12人星形胶质细胞以及神经胶质瘤细胞系T98G、U251、U87、A127细胞。按照Lipofectamine?3000试剂说明书将circHIPK3短发夹RNA（sh-circHIPK3）、pc DNA3.1-circHIPK3、mi R-124-3p模拟物（mi R-124-3p mimics）和pc DNA3.1-WEE1转染T98G细胞。应用实时荧光定量PCR检测circHIPK3和mi R-124-3p在肿瘤组织、对应瘤旁组织和肿瘤细胞系中的表达情况;CCK-8法测定T98G细胞增殖活力;Transwell?法检测T98G细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因验证mi R-124-3p与circHIPK3和丝氨酸/苏氨酸激酶WEE1的靶向关系;Western blot检测WEE1与上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）等上皮间质转化相关蛋白的表达情况。此外,circHIPK3和WEE1竞争性结合mi R-124-3p后,再次采用CCK-8法、Transwell?法分别检测T98G细胞的增殖和侵袭能力变化。结果实时荧光定量PCR显示circHIPK3在神经胶质瘤组织和肿瘤细胞系中高表达,且神经胶质瘤T98G细胞表达水平最高,差异均存在统计学意义（P<0.05）。敲减circHIPK3可显著抑制T98G细胞的增殖活力和侵袭能力;Western blot结果显示敲减circHIPK3后,E-cadherin蛋白表达水平增加,但N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平降低,差异均具有统计学意义（P<0.05）,提示可有效抑制神经胶质瘤细胞EMT过程。双荧光素酶素酶报告基因结果证实mi R-124-3p是circHIPK3的靶基因,WEE1是mi R-124-3p的靶基因,二者均具有直接靶向关系。circHIPK3可靶向下调mi R-124-3p的表达水平。同时过表达mi R-124-3p与circHIPK3或WEE1,或共转染sh-circHIPK3和pc DNA3.1-WEE1可恢复过表达mi R-124-3p对T98G的增殖、侵袭和EMT的抑制作用。circHIPK3和WEE1存在竞争性机制吸附mi R-124-3p促进T98G细胞生物学行为。结论circHIPK3在神经胶质瘤细胞中表达增高,并通过与丝氨酸/苏氨酸激酶WEE1竞争性结合mi R-124-3p结合位点,下调mi R-124-3p对WEE1的抑制作用,上调WEE1的表达,进而促进神经胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。不仅如此,circHIPK3有可能为神经胶质瘤的临床诊断和治疗提供一个有效的分子靶标。
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