ELMOD2对胃癌细胞MGC803生物学特性的影响及其机制研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuobin0904
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目的:胃癌是一种常见的恶性肿瘤,其发生发展的分子机制尚不十分清楚,对此深入研究,有助于发现新的分子靶点,对胃癌的诊断、治疗具有重要意义。本课题组前期研究表明S100A4可影响胃癌细胞的增殖、迁移、凋亡及失巢凋亡等特性;并利用基因芯片技术筛查S100A4下游的差异表达基因谱,ELMOD2是其中之一。ELMOD2(ELMO domain containing 2)是人类ELMO蛋白家族的成员,目前关于ELMOD2的功能研究报道较少。有研究表明,ELMOD2与家族性特发性肺纤维化发生有关,也可影响脂类代谢及小鼠卵母细胞减数分裂。但是ELMOD2对肿瘤细胞生物学特性的影响目前尚未见报道。鉴于S100A4对胃癌等肿瘤细胞生物学特性具有重要影响,我们推测,作为S100A4的下游基因,ELMOD2可能影响胃癌细胞的生物学特性,并介导S100A4的作用。另有研究表明,ELMOD2可与ARL2相互作用,并且是ARL2的GTP酶激活蛋白。已有研究证实,ARL2影响结直肠癌、宫颈癌等肿瘤细胞的生物学特性。我们进一步推测ELMOD2可能通过ARL2而影响胃癌细胞的生物学特性。为验证我们的推测,本实验首先研究了ELMOD2对胃癌细胞MGC803增殖、迁移及凋亡的影响,并检测增殖、凋亡及迁移相关蛋白的表达,初步探讨其分子机制;进一步研究了ELMOD2是否介导S100A4对MGC803细胞迁移的影响,以及ELMOD2是否通过ARL2而影响MGC803细胞的迁移。希望通过本研究加深理解胃癌发生发展的分子机制,为胃癌的分子靶向治疗提供新的线索。研究方法:培养人胃癌细胞系MGC803,S100A4特异性si RNA转染细胞,实时定量PCR及Western blot检测S100A4及ELMOD2表达。ELMOD2表达载体转染细胞,检测ELMOD2表达(方法同上);CCK-8实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blot检测PCNA、BAX、BCL-2及VIMENTIN蛋白表达。S100A4-si RNA与ELMOD2表达载体或空载体共转染细胞,ELMOD2表达载体与ARL2-si RNA或NC-si RNA共转染细胞,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果:1、实时定量PCR及Western blot结果显示,RNA干扰沉默MGC803细胞中S100A4表达后,ELMOD2 m RNA和蛋白表达水平均显著降低,表明ELMOD2是S100A4的下游基因。2、实时定量PCR及Western blot结果显示,GV141-ELMOD2表达载体转染可使MGC803细胞中ELMOD2 m RNA和蛋白表达水平均显著增高,即过表达ELMOD2。3、CCK-8细胞增殖实验结果显示,过表达ELMOD2使MGC803细胞的增殖能力显著增高。4、流式细胞术实验结果显示,过表达ELMOD2使MGC803细胞的凋亡率显著降低。5、Transwell细胞迁移实验结果显示,过表达ELMOD2使MGC803细胞的迁移能力显著增高。6、Western blot结果显示,过表达ELMOD2使MGC803细胞中增殖相关蛋白PCNA表达增高,凋亡相关蛋白BAX表达降低、BCL-2表达增高,迁移相关蛋白VIMENTIN表达增高。7、过表达ELMOD2显著回复S100A4沉默对MGC803细胞迁移的抑制效应,表明ELMOD2可介导S100A4对胃癌细胞迁移力的影响。8、ARL2沉默显著回复ELMOD2过表达对MGC803细胞迁移的促进效应,表明ELMOD2通过ARL2影响胃癌细胞的迁移力。结论:1、ELMOD2是S100A4下游的重要基因。2、ELMOD2促进MGC803细胞的增殖和迁移,并且抑制其凋亡。3、ELMOD2影响MGC803细胞中PCNA、BAX、BCL-2及VIMENTIN蛋白表达。4、ELMOD2介导S100A4对MGC803细胞迁移力的影响。5、ELMOD2通过ARL2影响MGC803细胞的迁移力。
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