【摘 要】
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目的:类风湿性关节炎（RA）是一种常见的风湿病,主动脉钙化是RA患者心血管疾病的典型病理特征,血清IL-6水平升高是RA患者发生血管钙化的独立危险因子,但尚不明确。通过外源性引入鼠IL-6载体,实现再循环中长期高表达IL-6,构建一种由IL-6介导的慢性系统性炎症的动物模型,探讨IL-6在血管钙化中的作用及其诱导血管平滑肌细胞（VSMC）成骨样分化的机制。方法:1.构建含有鼠IL-6的基于腺相关病
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目的:类风湿性关节炎（RA）是一种常见的风湿病,主动脉钙化是RA患者心血管疾病的典型病理特征,血清IL-6水平升高是RA患者发生血管钙化的独立危险因子,但尚不明确。通过外源性引入鼠IL-6载体,实现再循环中长期高表达IL-6,构建一种由IL-6介导的慢性系统性炎症的动物模型,探讨IL-6在血管钙化中的作用及其诱导血管平滑肌细胞（VSMC）成骨样分化的机制。方法:1.构建含有鼠IL-6的基于腺相关病毒（AAV）的p HBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP载体,并利用HEK-293T细胞从m RNA水平及蛋白水平验证转染效率。2.将C57BL/6J小鼠（24周龄,雄性,21只）随机三组:AAV-IL-6组、空载对照（AAV-Ctrl）组、空白对照（saline）组,7只/组。在0周,8周,16周行尾静脉注射100μL0.5×1010vp/m L的AAV-IL-6、空载AAV、生理盐水进行干预。定期检测小鼠血清IL-6（s IL-6）水平。观察记录小鼠一般情况、行为学改变、一般炎症指标（血常规、血生化、C反应蛋白）。干预后的第24周处死小鼠,苏木精-伊红染色和油红O染色观察组织（心肌、肝脏、脾脏、肾脏、大肠、股四头肌、膝关节、股骨中段）组织结构病理状态。3.将Samp-6小鼠（24周龄,雄性,24只）和C57小鼠（24周龄,雄性,24只）均随机分为AAV-IL-6组、AAV-IL-6+sgp130组、空载对照（AAV-Ctrl）组、空白对照（saline）组,6只/组,干预方法同上。其中AAV-IL-6+sgp130组小鼠另外每周注射150 ng的sgp130。干预后的第24周,处死小鼠并取主动脉,Von-Kossa染色观察主动脉钙化情况,免疫组化检测钙化相关蛋白OC、OPN;成骨分化相关分子BMP-2、Runx2;Jak2/Stat3/Wnt5a信号通路蛋白表达情况。结果:1.在最适病毒感染复数（MOI）条件下,AAV-IL-6转染293T细胞后3天,细胞内均可观察到强绿色荧光,并在特定时间点进行间断检测,AAV-IL-6在m RNA水平和蛋白水平均相对于两组照组有近30000倍的高水平表达。2.实验小鼠在干预时间内均存活且肝肾功能正常。AAV-IL-6组血清IL-6水平中度升高（75.41-169.28pg/m L）,与慢性系统性炎症（SCI）状态相当。与对照组小鼠相比,观察到AAV-IL-6小鼠饮食摄入减少、休息时间和活动幅度减少、代谢率增加、持续的体重减轻的现象。同时,AAV-IL-6小鼠组小鼠的中性粒细胞计数和CRP水平升高,白蛋白水平降低,病理可见多脏器局灶或散在免疫细胞浸润。AAV-IL-6小鼠骨皮质和骺板减少,肌纤维间隙中明显的肌萎缩和丰富的脂肪浸润。3.Samp-6小鼠的AAV-IL-6组可观察到IL-6特有的动脉中层钙化。与对照组相比,Samp-6小鼠及C57小鼠的AAV-IL-6组钙化相关蛋白、成骨分化相关分子以及Wnt5a信号通路关键分子（Jak2/Stat3/Wnt5a）蛋白表达上调（P＜0.05）。AAV-IL-6+sgp130组小鼠阻滞IL-6的钙化作用,上述相关蛋白相对于AAV-IL-6组表达下调（P＜0.05）。结论:本研究成功构建了具有长期最佳循环IL-6水平的慢性系统性炎症小鼠模型,表现出基本的SCI相关表型,如病理行为学、急性期反应、骨质疏松症和肌肉减少症等。IL-6是诱导VSMC钙化的重要分子,其中Jak2/Stat3/Wnt5a可能是VSMC钙化的相关信号通路。
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