细胞色素P450是一类能与CO结合，形成的复合物在450nm附近具有最大吸收峰的血红蛋白的总称。细胞色素P450nor是一类独特的细胞色素P450，它在真菌反硝化中扮演着重要的角色。P450nor起着一氧化氮还原酶的作用，能以NAD（P）H为直接电子供体将NO还原成N₂O。虽然它属于P450超家族，但没有加单氧酶的活性。迄今为止，已从真菌和酵母中克隆了多种P450nor基因，表明其存在的普遍性。本研究将真菌细胞色素P450nor基因克隆到高效表达载体pET-28的BamH Ⅰ／HindⅢ位点，得到重组原核表达质粒pET-p450nor，转化大肠杆菌BL21菌株，经IPTG诱导获得高效表达真菌细胞色素融合蛋白His-P450nor。SDS-PAGE蛋白电泳表明在43kD处出现强特异带。His-Tag柱在2.5h内一步纯化可溶性融合蛋白20.8mg，纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异性抗体。Westernblot和ELISA检测结果显示，该抗体与表达的融合蛋白呈阳性反应，效价在64，000以上。纯化的融合蛋白His-P450nor能通过催化NO来抑制肿瘤细胞SSMC-7721肿瘤细胞的生长。 利用Bac-to-Bac杆状病毒载体表达系统将真菌细胞色素P450nor基因克隆到转移载体pFastBacl中，构建重组质粒pFastBac-P450nor。再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中发生转座作用，得到含P450nor基因的重组穿梭载体rBacmid pAc-P450nor。分离提取重组Bacmid DNA，并转染培养的昆虫细胞Sf9，得到重组病毒rAc-P450nor。经酶切和PCR鉴定，细胞色素P450nor基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下。SDS-PAGE分析证明：表达蛋白的分子量为43kD左右。Western blotting分析结果表明：有一条特定的杂交带存在，且分子量相同（约43 kD）。进一步证明了含有真菌细胞色素P450nor基因的重组表达载体和重组病毒构建成功，并在昆虫细胞Sf9中实现了高效表达。经MTT法测定表达的细胞色素P450nor具有还原NO的生物学活性。