应用酵母单杂交技术筛选平菇漆酶poxc转录因子研究

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本研究以平菇菌株新831为研究对象,通过酵母单杂交技术筛选漆酶poxc基因的转录因子。主要研究内容及结论如下:在漆酶基因poxc半定量的基础上,通过Plantcare和Softberry分析,选取部分平菇漆酶poxc的启动子区域,克隆到质粒pAbAi的多克隆位点上构建成诱饵质粒,转化酵母菌Y1H感受态细胞得到诱饵菌株;选用平菇幼菇期子实体为材料提取总RNA,构建ds cDNA文库;把文库转到诱饵菌株感受态细胞中,经过SD/-Leu/-Ura/AbA平板筛选,得到4条与poxc启动子区域结合的蛋白的基因序列。将序列依次命名为laccase transcription factor1(ltf1)、laccase transcription factor2(ltf2)、laccase transcription factor3(ltf3)、laccase transcription factor4(ltf4),并提交到GeneBank,序列号为KJ720282、KJ720283、KJ720284、KJ720285。对其蛋白序列进行预测后,分析其疏水性、跨膜域、信号肽序列等,用SPOMA软件预测了蛋白的二级结构,用SWISS-MODEL预测其三级结构。根据分析结果,ltf1与天冬氨酸转氨酶具有16﹪的同源性,同时具有磷酸吡哆醛结合活性,但不是转录因子;ltf2与铁硫蛋白转运子基因、多重耐药蛋白基因pgp1、ABC转运子的MsbA蛋白基因均有50﹪的同源性;ltf3与斑萎蛋白同源性很高,与ltf2一样,具有较明显的寡聚化位点,推测它们通过转录因子间的相互作用来调控基因表达;ltf4与HTH型转录因子gabR具有很高同源性,推测其为转录因子。同时,通过原核表达验证了ltf3开放阅读框的正确性。
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