目的:建立一种快速且灵敏的检测肺炎支原体和沙眼衣原体的方法。第一部分是应用人类RNAse P基因作为内参的双重重组酶介导的等温核酸扩增（duplex-recombinase aided amplification,duplex-RAA）技术检测肺炎支原体和沙眼衣原体方法的建立与初步评价。第二部分是免提取核酸与双重重组酶介导的等温核酸扩增技术相结合检测以此简化核酸提取过程,缩短双重RAA方法检测肺炎支原体和沙眼衣原体的时间,并对其进行应用与初步评价。方法:1.分别选择肺炎支原体的P1基因和沙眼衣原体的ORF8基因作为靶基因,在这两个基因内的保守序列处,根据RAA设计原则设计探针引物,之后加入针对RNAse P基因设计的引物探针,通过优化体系建立检测肺炎支原体和沙眼衣原体的双重RAA方法。通过10倍梯度稀释的重组质粒评估灵敏度,通过对可经呼吸道感染的其他病毒和细菌的临床标本评估特异性。最后用130例疑似肺炎支原体或沙眼衣原体感染的患者的临床样本进行临床检测性能评价,使用商品化的荧光定量试剂盒作为平行对照实验。2.用样本释放剂处理原始标本后提取核酸达到简化核酸提取步骤的目的,将免提取核酸法与双重RAA技术相结合检测肺炎支原体和沙眼衣原体。用130例疑似肺炎支原体或沙眼衣原体感染患者的临床样本进行免提双重RAA方法的临床检测性能评价,使用商品化的荧光定量试剂盒作为平行对照实验。结果:1.双重RAA方法检测肺炎支原体和沙眼衣原体的灵敏度均为10拷贝/μL。与商品化荧光定量PCR的结果比较,肺炎支原体和沙眼衣原体的双重RAA方法的灵敏度和特异性均为100%,Kappa值为1（P＜0.001）;2.免提双重RAA方法在检测临床标本和稀释过的临床标本时,均可成功提取到核酸,其结果在与商品化荧光定量PCR结果比较中表现良好,两种检测方法具有良好的一致性,Kappa值为1（P＜0.001）。结论:本研究成功建立了一种操作简单、特异性强、灵敏度高且快速的免提核酸与双重RAA技术结合的方法用于检测肺炎支原体和沙眼衣原体,并表现出了良好的临床检测性能。