猪萨佩罗病毒（Porcine sapelovirus,PSV）属于小RNA病毒科萨佩罗病毒属。猪感染该病毒可以引起腹泻、猪脑脊髓灰质炎、肺炎等疾病或者呈无症状感染,并且各年龄段的猪均可感染此病毒。目前,PSV在国内外均已有报道,为了掌握中国四川地区PSV的感染情况,本研究开展了PSV病原分离鉴定和建立了荧光定量RT-PCR检测方法,主要内容如下:在四川绵阳某规模化猪场采集腹泻母猪的粪便拭子,从中分离获得四川株PSV毒株,命名为CHN-SCMY-2021。对分离毒株进行培养特性研究和全基因组测序分析。结果显示:第20代的四川株PSV CHN-SCMY-2021株感染LLC-PK1细胞后,在36 h时病毒滴度最高达107.33TCID50/m L。分离株在LLC-PK1细胞上能稳定传代,传代至第25代时病毒的滴度达到106.71TCID50/m L。分离毒株感染ST细胞后能产生蚀斑,经过三轮蚀斑实验可得到纯化后的病毒。对病毒粒子进行浓缩和负染,在透射电镜下可见直径约30 nm的病毒粒子。用二代测序技术测定CHN-SCMY-2021的全基因组序列（Genbank收录号:OL598599）,基因组全长7540 nt,包括466 nt的5′UTR序列、6996 nt的多聚蛋白基因和78 nt的3′UTR序列。基于全基因组序列的遗传进化分析显示,PSV四川分离株CHN-SCMY-2021属于中国地区毒株,与其它中国毒株序列高度相似,亲缘关系相近。为研究PSV四川株CHN-SCMY-2021对仔猪的致病性,将5m L分离毒株的病毒液(TCID50=106.57/m L)经口服感染3头6日龄仔猪。V2攻毒仔猪在攻毒后第1天开始出现腹泻症状,V1仔猪在攻毒后第2天开始腹泻,腹泻症状持续2～3天,V3仔猪全程无明显临床症状,对照组均无异常症状;在攻毒后第5天,对仔猪实施安乐死并剖检观察,可见攻毒仔猪肠道鼓气膨大,肠壁变薄且透明,内容物呈水样;对肛门拭子进行病毒检测,结果显示3头攻毒仔猪均存在粪便排毒情况;病毒在不同组织中的含量检测显示,在V1攻毒仔猪中,仅肺脏组织中可检测到少量病毒(102.89 copies/g)的存在;在V2攻毒仔猪的组织中,胃(103.06 copies/g)、回肠(103.05copies/g)、盲肠(103.56 copies/g)中可检测到病毒;在V3攻毒仔猪的胃(102.57 copies/g)、十二指肠(103.67 copies/g)、空肠(103.04copies/g)中可检测到病毒。组织病理分析显示,与对照组相比,攻毒仔猪的肠道存在黏膜水肿,黏膜下层排列疏松,肠轴间距增加以及淋巴细胞浸润等病理变化。结果表明PSV四川株CHN-SCMY-2021能引起哺乳仔猪发生腹泻或无症状感染。本研究还建立了一种PSV的实时荧光定量PCR检测方法,并应用于四川地区的腹泻猪群样本检测。根据Gen Bank中的PSV基因序列,选择比较保守的3D基因区域设计引物,优化反应程序与扩增体系,评估方法的特异性、灵敏性及重复性。结果表明:优化的最佳引物浓度为0.6μmol/L,退火温度为60℃;灵敏性试验显示最低检测限度为1.34×10~1 copies/μL的标准品;特异性试验显示本研究建立荧光定量PCR仅可扩增出PSV阳性质粒模板,而PRRSV、PPV、PEV、JEV、PCV、TGEV、PDCo V、PEDV等病毒模板均无扩增;本方法的批内和批间变异系数均小于1%,重复性良好;应用建立的荧光定量PCR方法检测2013～2021年期间四川地区的434份腹泻病料,共检出130份阳性样本,总体阳性率为29.9%（130/434）;按年份统计结果显示,四川地区猪群在2013年已存在PSV感染的情况,且2013～2021年所有年份均检出PSV阳性样本;按地区统计检测结果,四川16个地区样本中均检测出PSV,表明PSV在四川地区分布广泛。综上,本研究从四川分离获得一株PSV毒株CHN-SCMY-2021,该毒株对仔猪有致病性,同时建立了PSV的荧光定量检测方法,应用于对四川地区腹泻猪样本进行检测。本试验为后续开展PSV研究奠定了基础。