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研究背景:原发性肝癌（后简称“肝癌”）是我国常见的肝脏恶性肿瘤,发病率及死亡率均位居前列。早期肝癌首选手术治疗,旨在根治性切除;晚期肝癌以分子靶向治疗、化疗、免疫治疗等系统治疗为主,旨在尽可能控制肿瘤生长、延长患者生存时间。目前在我国获批的用于晚期肝癌一线治疗的药物包括索拉非尼、仑伐替尼、阿替利珠单抗联合贝伐珠单抗、FOLFOX4等,对于已接受索拉非尼并进展的患者,二线治疗选择瑞戈非尼、阿帕替尼、卡瑞丽珠单抗等。虽然肝癌治疗已取得一些成果,但总体疗效不突出,患者生存获益有限,且部分患者无法承担高额的治疗费用,亟需疗效相当、价格可及的药物。抗血管生成药物在晚期肝癌治疗领域占据重要地位。随着我国新药研发能力的不断提高,国产分子靶向药物逐渐进入临床。甲磺酸阿帕替尼为我国自主研发的1.1类药物,通过选择性抑制血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2）,促进肿瘤血管正常化,抑制肿瘤细胞生长,最早被批准用于晚期胃腺癌及胃-食管结合部腺癌的三线及三线以上治疗。其广谱抗肿瘤作用亦在肝癌中得以体现,研究表明,阿帕替尼不仅在体外具有抑制肝癌细胞增殖、侵袭和转移、促进肝癌细胞凋亡的作用,还可为肝癌患者带来生存获益,2020年12月已在国内获批晚期肝癌的二线治疗,而一线数据还有待真实世界临床研究进一步完善。此外,相比于其他抗血管生成靶向药物,阿帕替尼价格低,可及性强,在国内具有良好的应用前景。耐药是肝癌研究的另一热点,肝癌发生发展受诸多信号通路所调控,耐药模式也较为复杂,以阿帕替尼为代表的抗血管生成药物在肝癌的耐药机制尚未完全明确,因此进一步挖掘肝癌对阿帕替尼等抗血管生成药物的耐药机制,探寻新的治疗靶点,对肝癌患者全程管理、延长生存期具有重要临床价值。目的:1.收集本中心（西京医院）接受阿帕替尼治疗的肝癌患者临床资料,详细随访,在真实世界研究中评估阿帕替尼对肝癌患者的有效性和安全性。2.在体外建立阿帕替尼耐药肝癌细胞株,初步探索相关耐药机制。方法:1.真实世界临床研究:选取空军军医大学西京医院2016年1月至2019年6月收治的接受阿帕替尼治疗的原发性肝癌患者,Kaplan-Meier法进行生存分析及亚组生存分析,配对T检验比较治疗前后血清AFP水平变化情况,Cox比例风险模型分析阿帕替尼治疗肝癌疗效之影响因素,统计并分析相关不良反应。2.耐药相关体外研究:选取人SNU-739和SNU-878肝癌细胞系,采用低浓度梯度递增法建立阿帕替尼耐药细胞株,MTS法、平板克隆形成实验、流式细胞术进行各阶段药敏试验。（1）对野生型和耐药型细胞进行药敏试验,验证其耐药特性。（2）利用两组细胞样本进行RNA芯片检测,对m RNA表达差异较大的基因进行q PCR验证,筛选出差异最大的基因——氨基甲酰磷酸合成酶1（carbamoyl phosphate synthetase 1,CPS1）,western blot法进一步验证其蛋白表达差异。（3）构建CPS1稳定过表达耐药细胞株,对转染前后细胞进行药敏试验,验证CPS1功能。（4）查阅文献发现CPS1受肝激酶B1（liver kinase B 1,LKB1）负性调控,western blot法验证野生型和耐药型细胞LKB1蛋白表达差异。构建LKB1稳定敲低耐药细胞株,对转染前后细胞进行western blot检测及药敏试验,验证LKB1功能。结果:1.真实世界临床研究:共回顾性收集51例接受阿帕替尼治疗的原发性肝癌患者。（1）m PFS为8个月（95%CI:5.9-10.1）,且治疗后血清AFP水平较治疗前明显降低。（2）Child-Pugh分级、肝脏病灶数量、肝脏最大病灶长径可能是影响阿帕替尼疗效的（PFS）的危险因素。（3）阿帕替尼相关不良反应发生率为93.2%,包括手足皮肤反应、高血压、胃肠道反应、血小板减少、腹泻、转氨酶升高、胆红素升高、白细胞减少、蛋白尿等。通过调整药物剂量并给予对症治疗,所有患者均可耐受不良反应。2.耐药相关体外研究:（1）经阿帕替尼处理后,耐药型细胞的细胞活力、克隆形成数显著高于野生型细胞,而细胞凋亡率显著低于野生型细胞,表明成功建立阿帕替尼耐药细胞株。根据MTS实验数据,给药48h后阿帕替尼的抑制作用最明显,故选取48h作为标准给药时间。（2）与野生型细胞比较,CPS1 m RNA及蛋白在耐药型细胞中显著下调。（3）过表达CPS1可显著降低肝癌细胞活力及克隆形成数、提高细胞凋亡率,提示过表达CPS1可恢复肝癌对阿帕替尼的敏感性。（4）LKB1在耐药型细胞中表达上调,且负性调控CPS1表达,下调LKB1亦可恢复肝癌细胞对阿帕替尼的敏感性。结论:1.单中心真实世界临床数据显示,阿帕替尼可改善原发性肝癌患者的预后,且安全性良好。2.体外研究表明,经过阿帕替尼长期诱导,肝癌细胞株中LKB1表达水平增高并下调CPS1,使细胞产生耐药性;而过表达CPS1或沉默LKB1均可逆转肝癌对阿帕替尼的耐药性。