【摘 要】
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目的:探究牛蒡低聚果糖（burdock fructooligosaccharide,BFO）对糖尿病肾病的保护作用,并研究其可能的作用机制。方法:（1）体内实验:采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导C57BL/6J小鼠构建糖尿肾病模型,实验分为正常组（NC）、模型组（DN）、BFO组（200 mg/kg/day）。连续给药8周后,麻醉,眼球取血,血清用于测定生
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目的:探究牛蒡低聚果糖（burdock fructooligosaccharide,BFO）对糖尿病肾病的保护作用,并研究其可能的作用机制。方法:（1）体内实验:采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导C57BL/6J小鼠构建糖尿肾病模型,实验分为正常组（NC）、模型组（DN）、BFO组（200 mg/kg/day）。连续给药8周后,麻醉,眼球取血,血清用于测定生化指标以及肾功能相关指标。HE染色、Masson染色、PAS染色和透射电镜观察肾组织的变化。TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡率。实时荧光定量PCR（quantitative Real-time PCR,qPCR）、Western blot以及免疫组化检测Nrf2、HO-1、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白水平的变化。（2）体外实验:采用含有30 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基诱导NRK-52E细胞构建糖尿病肾病模型,实验分为正常组（NG）、高糖组（HG）、高糖+不同浓度BFO组（62.5、125、250μg/m L）。CCK-8法检测BFO对NRK-52E细胞增殖的影响;流式细胞仪检测BFO对NRK-52E细胞凋亡率、活性氧以及线粒体膜电位的影响;酶标仪检测BFO对NRK-52E细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）水平的影响;qPCR以及Western blot检测Nrf2、HO-1、Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果:（1）体内实验:BFO能够降低糖尿病肾病小鼠的尿蛋白、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、血肌酐和尿素氮的水平,升高高密度脂蛋白低密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）的水平。同时也可以提高糖尿病肾肾病中SOD和CAT的水平。HE染色、Masson染色以及PAS染色结果表明,在DN组中肾小管排列紊乱,肾纤维化明显,糖原沉积增加,在BFO干预后,肾组织的病理状态明显改善。透射电镜观察到DN组中的足细胞与足细胞之间、内皮细胞与内皮细胞之间空隙增大,肾小管基底膜增厚,BFO干预后能够明显改善这些病理状态。TUNEL染色结果显示BFO干预明显降低DN组小鼠的肾组织细胞的凋亡。qPCR结果显示BFO能够上调DN组小鼠的Nrf2、HO-1、Bcl-2的mRNA的表达以及下调DN组小鼠的Bax的mRNA的表达水平。Western blot以及免疫组化的实验结果表明,BFO能够上调DN组小鼠的Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达以及下调DN小鼠的Bax蛋白表达水平。（2）体外实验:CCK-8法和Annexin V-FITC/PI试剂染色结果表明,与NG组相比,HG组中的NRK-52E细胞活力受到抑制（P＜0.05）,细胞凋亡率增高（P＜0.05）。BFO干预后的NRK-52E细胞活力明显增加（P＜0.05）,凋亡率明显下降（P＜0.05）。活性氧（reactive oxygen species,ROS）和线粒体膜电位实验结果表明,与NG组相比,HG组ROS含量明显上升,线粒体膜电位明显下降（P＜0.05）。BFO进行干预后的NRK-52E细胞的ROS含量下降（P＜0.05）,线粒体膜电位明显上升（P＜0.05）。与NG组相比,HG组SOD和CAT水平明显降低（P＜0.05）。并且BFO可有效抑制高糖诱导的SOD和CAT水平的降低（P＜0.05）。qPCR和Western blot结果显示,BFO能够上调HG诱导的NRK-52E细胞的Nrf2、HO-1、Bcl-2中mRNA和蛋白的表达水平,下调HG诱导的NRK-52E细胞的Bax中mRNA和蛋白的表达水平。结论:BFO能够降低糖尿病肾病小鼠的FBG、TC、TG、LDL-C的水平,并且升高HDL-C的水平,提高糖尿病肾病中SOD和CAT的水平。以及具有改善糖尿病肾病小鼠的肾功能作用,上调糖尿病小鼠中Nrf2和HO-1的mRNA与蛋白的表达水平,减轻HG诱导NRK-52E细胞的凋亡以及氧化应激损伤,以及明显上调NRK-52E细胞中Nrf2和HO-1的mRNA与蛋白的表达水平。
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