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目的:(1)探究Wistar大鼠低血糖条件下下丘脑室旁核(paraventricular hypothalamic nucleus,PVN)、腹内侧核(ventromedical nucleus of the hypothalamus,VMH)、弓状核(arcuate nucleus,Arc)及脑桥外侧臂旁核(lateral parabrachial nucleus,LPBN)Nesfatin-1免疫阳性神经元与c-fos免疫阳性神经元共表达情况;(2)观察脑桥外侧臂旁核(LPBN)注射Nesfatin-1对正常大鼠低血糖反向调节的影响,探究其调节血糖的机制;(3)探究LPBN注射Nesfatin-1对不同剂量胰岛素诱导的低血糖反向调节的作用;(4)观察LPBN注射Nesfatin-1对低血糖致大鼠惊厥及死亡的影响。研究方法:(1)采用冰冻切片、免疫荧光双染技术观察低血糖条件下大鼠下丘脑三个核团:PVN、VMH、Arc以及后脑LPBN中Nesfatin-1免疫阳性神经元与c-fos免疫阳性神经元的共表达情况;(2)采用核团置管、核团微量注射和腹腔胰岛素诱导低血糖等技术探究大鼠单侧LPBN注射Nesfatin-1(50pmol、0.5μL)对低血糖反向调节的影响,并统计胰岛素诱导低血糖后大鼠惊厥和死亡的发生率并比较各组出现惊厥或死亡的时间。结果:(1)腹腔注射胰岛素两小时后,Nesfatin-1在下丘脑PVN、Arc核团中的表达量明显升高,而VMH则没有明显变化,LPBN中Nesfatin-1的表达也是明显升高的;同时,在PVN、Arc、LPBN三个核团中,Nesfatin-1与c-fos共表达也是明显高于对照组的(25.0±6.99比12.7±3.6,P<0.05;16.4±4.1比11.7±2.5,P<0.05;10.4±1.7比6.9±3.2,P<0.05),而在VMH则与对照组没有明显差异(22.0±3.3比21.0±4.2,P>0.05)。(2)腹腔注射低剂量胰岛素后90、120分钟,低剂量insulin+Nesfatin-1组血糖明显高于低剂量insulin+NS对照组(t=2.433,3.045;P=0.045,P=0.022)。而腹腔注射高剂量胰岛素后30,60分钟,高剂量insulin+Nesfatin-1组血糖明显高于高剂量insulin+NS对照组(t=2.967,3.546;P=0.011,P=0.003),但是在90,120分钟时,Nesfatin-1并不能持续升高血糖。并且Nesfatin-1组大鼠腹腔注射不同剂量胰岛素时,在30分钟高剂量胰岛素组血糖明显高于低剂量胰岛素组(t=4.363,P=0.003),在90,120分钟时,低剂量胰岛素组血糖高于高剂量胰岛素组,但没有统计学意义。(3)低剂量insulin+Nesfatin-1组大鼠惊厥和死亡的发生率明显低于低剂量insulin+NS组大鼠,但是高剂量insulin+Nesfatin-1组大鼠与高剂量insulin+NS组大鼠惊厥和死亡的发生率相比没有统计学意义。同时低剂量insulin+NS组与高剂量insulin+NS组大鼠惊厥的发作频率和幅度要高于实验组,死亡时间也早于实验组。结论:(1)胰岛素诱导Wistar大鼠低血糖后可以激活LPBN中的Nesfatin-1神经元。(2)Nesfatin-1参与低血糖反向调节并且LPBN中注射Nesfatin-1可以明显增强低血糖反向调节提高大鼠血糖,但是在严重低血糖(腹腔注射15IU/kg胰岛素)时,Nesfatin-1并不能完全逆转高浓度胰岛素所致的低血糖。(3)LPBN中注射Nesfatin-1可以改善严重低血糖引起的惊厥和死亡的发生。本实验结果为进一步探究LPBN中Nesfatin-1在糖尿病尤其是Ⅰ型糖尿病人低血糖症等相关并发症的预防以及治疗提供了一定的实验参考。