猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）的病原,PED主要引起高度传染性肠道疾病,受感染猪的肠上皮绒毛萎缩、腹泻、脱水和食欲下降,哺乳仔猪有极高死亡率,一直影响并困扰着全世界养猪业的发展,而且造成养猪业的巨大经济损失。冠状病毒的受体相互作用是由形成冠状病毒包膜上特有的大尖峰的三聚尖峰糖蛋白（S）介导的,病毒表面S蛋白与宿主细胞受体的结合是病毒感染的第一步,也是病毒趋向性的主要决定因素。目前对PEDV受体的研究颇具争议,还无法解释PEDV感染过程中的一些理论问题,猪氨基肽酶N作为PEDV的受体逐渐被否定。因此,对PEDV在细胞中的入侵和复制等感染过程的研究至关重要。为研究PEDV感染细胞的机制,本研究采用病毒铺覆蛋白结合技术和质谱技术筛选猪肠粘膜组织蛋白中与PEDV相互作用的蛋白,并研究其对PEDV感染细胞的影响。首先为了获得纯化的PEDV,本研究对实验室分离到的PEDV GDgh毒株进行了两轮蚀斑纯化,然后挑取单克隆进行大量培养,收取病毒上清液,然后采用20%蔗糖垫底的方法进行超速离心加以浓缩,对得到的病毒粒子进行电镜负染观察,可清晰看到冠状病毒具有的典型皇冠状结构;通过测定比较浓缩前后病毒的TCID50,可知超速离心可以有效提高病毒滴度。本研究采用猪肠粘膜组织蛋白进行SDS-PAGE,转膜后孵育经过纯化的PEDV,然后再与PEDV S1单克隆抗体孵育后显色。通过与未孵育病毒组相比,可见试验组在250～300 k Da之间有一明显条带,将对应处蛋白胶条切下进行质谱分析。结果初步筛选到6磷酸甘露糖/胰岛素样生长因子II受体（Mannose-6-phosphate/insulin-like growth factor II receptor,M6P/IGF2R）和蔗糖酶-异麦芽糖酶（Sucrase-isomaltase,intestinal,SI）为候选蛋白,通过分段构建其真核表达载体并设计各自相应的小干扰RNA,研究两者在PEDV感染过程中发挥的作用。结果表明M6P/IGF2R、SI均与PEDV S2蛋白存在相互作用,激光共聚焦结果显示,在Vero E6细胞内M6P/IGF2R、SI和PEDV S2都存在共定位现象,过表达M6P/IGF2R能够促进PEDV的复制,敲低M6P/IGF2R能够抑制PEDV的复制;相反地是,过表达SI能够抑制PEDV的复制,敲低SI能够促进PEDV的复制;M6P/IGF2R蛋白可以促进PEDV侵入细胞,SI蛋白可以抑制PEDV侵入细胞。PEDV受体的研究目前还处在探索阶段,对于受体的相关研究一直是科研人员的研究热点,至今并未有明确定义。本研究对进一步开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用机制的研究和以后药物靶点的筛选可提供一定的参考依据,为我国猪流行性腹泻的防控提供一定的理论支持。